2024年1月12日发(作者：)
-144
-医学研究生学报
2021
年
2
月第
34
卷第
2
期
J
Med
Posyt,Vol24,
No.2,
FePruao,
2021论
著(基础研究)NOD样受体家族蛋白3调控子宫内膜间质细胞
催乳素分泌的作用机制张
瑜，程
茜，王淑娴，戈
榭，马汝钧，姚
兵［摘要］目的NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)在子宫内膜中的生理性功能研究较少。文中旨在研究NLRP3在子宫
内膜间质细胞蜕膜化过程中的表达和调控作用。
方法
选自2020年4月至6月在东部战区总医院生殖中心2例不孕症
患者的子宫内膜样本。收集人增殖期("=10)及蜕膜期(a=
4)的子宫内膜。另选用SPF级34只6~8周龄雌鼠和4只雄
鼠，获取小鼠交配后见栓天数(dpc)02~72天的子宫内膜，采用Western
blot、免疫组化检测NLRP3的表达及定位。体外利用
对羟基苯甲酸甲酯(MPA)和8-漠-环腺苷酸(8-BacAMP)联合诱导人间质细胞系T-HESCs蜕膜化，检测蜕膜化过程中NLRP3
。的表达情况。干扰NLRP3的表达后，通过实时荧光定量PCR及ELISA分别检测细胞及其培养上清中蜕膜化标志物催乳素
(PRL)的表达情况。
结果
免疫组化结果显示，在人蜕膜期子宫内膜中，可见大量NLRP3阳性细胞,蜕膜期NLRP3的表达
量较增殖期显著上升。Western
blot结果所示,人蜕膜期子宫内膜较增殖期NLRP3显著高表达。免疫组化结果所示,NLRP3
在小鼠妊娠早期上调,dpc
32天表达最高，可见大量NLRP3阳性细胞表达，细胞质棕黄色深染，之后下降。Western
blot结果
所示，在小鼠妊娠早期，随着妊娠时间增加,NLRP3表达量先上升后下降,dpo
32天达到峰值，与dye
02天和dye
72天比较,
差异具有统计学意义(P<021)。Western
blot结果所示，随着诱导人间质细胞蜕膜化时间延长,NLRP3及caspase-S表达量显
著升高。与
14
h
NLRP3、caspase-S
蛋白表达量()26±024、、28±022)比较,0
h(
).00±02)、028±0.01)明显降低，24
h(2.26±
023、、25±0.05)明显升高(P<0.05)。
结论NLRP3可促进间质细胞蜕膜化过程中PRL的表达和分泌，为研究NLRP3在
子宫内膜围种植期调控间质细胞蜕膜化奠定基础。［关键词］NOD样受体家族蛋白3；蜕膜化;人子宫内膜间质细胞;催乳素［中图分类号］R34
［文献标志码］A
［文章编号］1008-8199(
2021
)02-0124-47［DOI］
1026571/j2nki+008-8199
2021.02203The
role
and
mechanism
of
NODEiVe
receetor
family
protein
3
in
reeulahng
prolactin
secretion
in
endome-
triai
stromai
celitZHANG
Yu1,CHENG
Xi2,WANG
Shu-xian2,GE
Xis2,MA
Ru-jun2 ,YAO
Bing2(
Schooi
of
Jiangse
University,
Zherdiang
212013
,
Jiangse,
China,
Rdrofuchou
Medicind
Center,
Gener-ai
Hospimi
of
Eastera
Theaht
Command,
PLA
,
Nanjing
212002
,
Jimase
,
China
)［Abshoct
］
Objective
The
physiolovicai
function
of
NOD-BSc
receptos
famity
protein
3
(NLRP3)
in
the
endometrium
has
not
bees
weS stuUieP.
This
stuUy
aims
to
investigate
the
expression
and
renulanon
of
NOD-BSe
receptos famSy
protein
3
(
NLRP3)
dus-
ing
the
decidualizanon
of
esdometriai
stromaS
cells.
Methods
Endometrium
was
collecteP
from
human
yrokferayve
and
yeciyuai
phases and
pAnnant
mice.
Thc
expression
and
localizanon of
NLRP3
were
detecteP
by
Western
blot
and
immunohistochemistA.
The
dc-
cidualizanon
of
human
meseschymaS
ceS
line
T-HESCs
was
induceP
基金项目:江苏省自然科学基金(BK22177622)；江苏省科
by
MPA
and
8-Br-xAMP
in
vitro
to
detect
the
expression
of
NLRP3
技项目(BE2216756)作者单位：212513镇江，江苏大学医学院[张
瑜(医学硕
during
decidualizanon.
Aftes
anocyyown
of
the
expression
of
NLRP3,
the
expression
of
yrolacnn
(dPRL)
,
a
decidualizanon
marUes,
was
士研究生)];212050南京，东部战区总医院(原
南京军区南京总医院)生殖医学科(程
茜、王
detecteP
by
PCR
and
eszyme-BneeP
immunosorUest
assay淑娴、戈榭、马汝钧、姚兵)通信作者:姚
兵，E-mail
(ELISA
)
,
Aspectivela.
Resoltt
Immunohistochemicai
asuCsshoweP
that
a
larfe
numbec of
NLRP3-positive
cells
were
sees
in
the
esdometrium
during
the
deciduai
phase,
and
the
expression
of
NLRP3
医学研究生学报ZU
年2月第34卷第2期
JMep
Posf
a,
VoL34,
No.2,
Fetmuy,
ZOO・125・durinn
the
deciduai
phase
increaset
sivnificantO
comparet
with
the
protferaUve
phase.
The
results
of
Westeru
blot
showet
that
NLRP3
was
significantp
hRher
R
the
endometrium
durinn
the
decidua
phase
than
durinn
the
proliferation
phase.
The
results
of
immuhohisto-
chemistm
showet
that
NLRP3
was
uu-reculateP
in
the
earlo
00X1—0
of
mice,
and
the
expression of
dpc
was
the highest
at
32
days.
A
larye
cumber of
NLRP3-positive
cells
were
expresset
and
the
cytoplasm
was
darUlo
staiceP
with
brownish-yebow,
and
then
declmeX.
Western
blot
results
showet
that
in
the
earty
-01—0
of
mice, with
the
itcmase
of
-01—0
tiRe,
the
expression
of
NLRP3
first
ic-
creaset
and
then decreaset,
dpc
reachet
a
peat
at
32
days,
comparet
with
dpc 0.5
days
and dpc
72
days,
the(^^61'6100
was
sianifi-
cact ( P<4.55)
■
After
NLRP3
mRNA
levels
were
dowc-reaulated
bs
65%,
T-HESCs
were
intuced
to
decidualiee
ic
vitro,
and
the
de-
ciduaUzation
1810x0
dPRL
ic
the
mesenchymal
cells
and
ic
the
celi
colture
supematact
was
inhibited
(P<4.55)
■
Conclusion
NL-RP3
cat
promote
the
expression
and
secretion
of
dPRL
ic
the
process
of
deciduaUzaUot
of
intersPCai
cells,
and
cottriduPna
to
explore
the
reculaUoc
of
NLRP3
ic
deciduaUzaUot
of
intersPCai
cells
durina
the
peri-61antina
peUod.[Key
worOt
]
NOD-lide
receptor proteic 3；
deciduaUzaUot; human endometriai stromai
cells;
prolactic0引
言和内膜异位症、子宫内膜炎、产褥感染等疾病的蝇报
道⑺9]
,NLRP3在子宫内膜中的生理性功能研究较
子宫内膜间质细胞蜕膜化是胚胎植入的关键,
少。本研究旨在探讨NLRP3在围种植期子宫内膜
的时空表达情况及其对间质细胞蜕膜化过程的影
有效的蜕膜化是建立和维持正常妊娠的前提，蜕膜
化的间质细胞从成纤维细胞转变为上皮样细胞，并
分泌蜕膜化标志性激素催乳素(decidual
prolactin,
dPRL)，具有调节滋养细胞侵袭、抵抗炎症和氧化应
响,为下一步研究子宫内膜容受性及胚胎着床调控
机制提供新的思路。1资料与方法激以及抑制母体局部免疫反应的独特能力[1],蜕膜
的程度和质量对后续滋养细胞的侵袭、胎盘的形成
12
人子宫内膜标本的获取
选取2022年4月至
6月在东部战区总医院生殖中心22例不孕症患者
和胎儿宫内生长有着显著影响⑵0正常妊娠的建立和维持需要子宫内膜中促炎和
子宫内膜样本。标本经病理证实为增殖期(12例)
或蜕膜期(12例)样本。本研究经东部战区总医院
抗炎介质的动态平衡⑻0在胚胎早期种植中,促炎
过程占主导位置。窗口期的子宫内膜在雌孕激素的
伦理委员会批准(批件号:2222DZGZRZX-689),患
者及家属均已签署知情同意书。12实验动物模型的构建及标本的获取实验选
用SPF级30只6~8周龄ICR雌鼠和12只雄鼠，购
自于北京维通利华实验动物技术有限公司，合格证
号为
“0.201614328。饲养条件：温度(22±2)OC,24
h明暗交替。适应性喂养1周后，按雌雄小鼠2：1
调控下，发生一系列高炎症反应，子宫内膜定植免疫
细胞富集，间质细胞发生间充质-上皮转化
cOymal-epithelialtransitios,
MET)过程，分泌大量炎
症因子，包括集落刺激因子-1、IL-8等，这些免疫细
胞、炎症介质和炎症因子共同构成子宫内膜的“免
疫微环境”，促进蜕膜化的发生，为正常妊娠提供了
合适的营养和支持+5]
0NOD
样受体家族蛋白
3
(
NOD-litc
receptor
pratein
3, NLRP3)属于NLRs蛋白家族成员，是重要的
合笼交配,次日检查雌鼠阴道栓，交配后见栓天数
(days
post
coitus,
duel
记为
duc0.50
分笼喂养怀孕
雌鼠1~3
d,于当日清晨8点，颈椎脱臼法处死小
鼠，解剖出子宫，分别记为ddc0.5、dpcr.5、ddc2.5、
ddc32、dpc42、dpc52、ddc62
和
duel20
取其中2~
3
cm子宫立即放入4%的多聚甲醛中固定,石蜡包
细胞内模式识别受体。可通过与CARD结构域的
凋亡相关颗粒蛋白(apoptosis-assacmted
spech-litc
protein,
ASC
)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶
1
(
cysteine
pmtecsc-1,
Caspase-1)组装形成经典炎症
埋，切片以备免疫组织化学使用。其余子宫采用挤
压法(用弯曲30。的针头，沿输卵管端向宫颈挤压滑
小体，促进Caspasc-1前体的自我剪切，继而增强细
胞因子n-ip的成熟与分泌，而后启动和参与
炎症反应的核心环节[6]
0利用The
human
protein
at-
ia数据库进行搜索,可发现NLRP3的蛋白和mR动)取得内膜，获取的子宫内膜组织分别用于后续
的
qRT-PCR
和
Western
blai
实验。12
主要试剂
RNA提取试剂盒购自于中国BEI-
BEI
生物公司；PUmeCcUptRT
mastermix
及
SYBRlmmCExTan试剂盒购自于日本TaKaRn公
NA
含量在子宫内膜组织中呈现相对较高水平，提
示该分子对内膜细胞的调控潜能。但仅发现NLRP3
-126
-医学研究生学报
2021
年
2
月第
34
卷第
2
期
J
Med
Posh-,
Vol24,
No.2,
FePruau,
2021司；RIPA裂解液购自于德国Sigma公司；ECL发光
122
Western
bloh子宫内膜组织加入RIPA裂解
液购自于美国BioworlU公司；PMSF、BCA蛋白浓度
测定盒购自于中国碧云天生物技术有限公司；小鼠
抗兔NLRP3抗体购自于美国Abeam公司；兔抗小
液，经组织破碎仪破碎后离心(12
000xg,15
min,4
C
)，收集上清液即为提取到的蛋白，用BCA法测定
蛋白浓度。配置8%SDS-PAGE凝胶电泳，100
V恒
鼠caspase-S抗体购自于美国Novus
Biologicais公
司；兔抗小鼠0-actin抗体购自于美国Celt
SignaUng
Techdonhy公司;小鼠抗兔、兔抗小鼠二抗均购自于
压电泳，待漠酚蓝刚出胶时，关闭电泳，转移凝胶至
PVDF膜上,275
mA转移90
min,后置于5%BSA中
室温封闭1
h,按比例稀释一抗(NLRP3
1
:
1000、
Caspasn-1
1
：
1000、0-actin
1
：
2000)孵育，4
C
摇床
美国invitAgex公司，NLRP3siRNA及阴性对照siRNA
由上海吉玛基因生物有限公司合成丄igofectami-
过夜,次日用
TBST
洗膜,室温孵育对应二抗,
TBST
ne™
3400
Transfectioc
Reagent购于赛默飞世尔科技
公司，Vidas
prolactin
kits
购于法国
bis
Meuexx
公司。12实验方法122免疫组织化学
取小段新鲜子宫组织(2
~ 3
cm)
,4%的多聚甲醛固定，脱水、透明、浸蜡、包埋、
切片，脱腊水化,用柠檬酸缓冲液高温修复,TBS缓
冲液冲洗。采用3%H2O1阻断内源性过氧化物酶,
PBS冲洗，再用14%的山羊血清37
°C封闭44
min,
NLRP3抗体用PBS按1：100稀释后于4
C冰箱孵
育过夜。次日复温后,TBS冲洗,室温孵育二抗44
min后滴加DAB显色,苏木精复染后用乙醇溶液脱
水，中性树脂封固,镜检。122实时荧光定量PCR(qRT-PCR)提取子宫
内膜组织的RNA,反转录成cDNA,反应条件为
37C15
mS,
85
C
5
s0
qRT-PCR
反应体系为：
SYBRGreexMixp
pnol/L,0.2
pnol/L
上游引物(14
p,mol/L)
,
0.
2
pmol/L
下游引物(14
pmol/L)
,
2
pmol/LcDNA产物和2
pmol/LddHO,循环条件为：
95
C14
s
酶活化,95
C5
s
变性,66
C20
s
退火,77
C
30
s延伸,40个循环。对扩增反应产物进行融解
曲线分析。引物设计序列如下:人NLRP3上游5，-
GATCTTCGCTGCGATCAACAG-3'-下游
5'-CGTG-
CATTATCTGAACCCCAC-3'；人
0-actin
上游
5'-
AGAAGCTGTGCTATGTTGCTC43-
下游
5-4GAGCCT4
CAGGGCATCGGA-3；人
PRL
上游
5-CAGACAAG-
GAGCAAGCCCAA-3；下游
5'-GCTCCTCAATCTCTA-
CAGCTTT-3；小鼠
NLRP3
上游
5'-TCTGCACCCG-
GACTGTAAAC-3；下游
5,-CATTGTTGCCCAGGT-
TCAGC-3'；小鼠
0-actin
上游
5'-GTTGGAGCAAA-
CATCCCCCA-3；下游
5'-CGCGACCATCCTCCTCT-
TAG-3；每个样本重复检验3次。通过2-mCt方法
计算NLRP3和PRLmRNA的相对表达量。洗膜后曝光、显影、定量。采用Imagei进行灰度值
测定分析，计算各组子宫内膜NLRP3蛋白的比值。122人工诱导间质细胞蜕膜化T-HESCs
(Human
endometriai
stromai celi，购自
ATCC
(
CRL-
4403TM)
0
T-HESCs采用含14%的碳吸附胎牛血清
无酚红的DMEM/F12培养基(D2906,
Sigma)于
95%湿度、37
C、5%
CO2的培养箱中培养。待T-
HESCs生长到50%~77%汇合度时，换成2%碳吸
附胎牛血清培养基,培养基中加入1
pmol/L对羟基
苯甲酸甲酯(methylparanex,
MPA)和
02
mmol/L
8-漠-环腺苷酸(8-BaxAMP)以构建体外蜕膜化模
型[10]o
48
h后在显微镜下观察到增大的圆形细胞,
然后收集细胞及其培养液，通过qRT-PCR测定细胞
中PRL
mRNA的表达，证实体外人工诱导蜕膜化模
型构建成功。122
细胞转染
待T-HESCs生长到56%~77%汇
合度时，按照转染试剂说明书，使用Ope-MEM™培
养基分别稀释转染试剂LinofectamineTM
3000
Trans-
fectioc
Reagent
(混合液
A
)和
5。nmol/L
NL-
RP3siRNA
(5'-GGAGAGACCUUUAUGAGAAT-3；和
阴性对照
siRNA,
(
5,-TUCUCCGAACGUGU-
CACGUTT-3；(混合液B)，混合液A和B按1
：
1体
积充分混匀，室温孵育10-15
min后分别滴入细胞
培养液中，轻摇混匀后放入培养箱。在转染后6
h,
用或不用
1
pmol/L
MPA
和
02
mmol/L
8-Br-xAMP
处理,siNC作为对照组。48
h后收集细胞用于分析
NLRP3的表达，收集细胞培养液。122
细胞培养液中dPRL的测定
取人工诱导T-
HESCs蜕膜化的各组细胞培养液,1200
Amin离心
5
min后去除细胞碎片，收集上清。采用Vidas
prolactin
kits
(Mini-Vidas)酶联免疫法检测细胞培养液
中
dPRL。12统计学分析统计学分析采用SPSS
16.2
医学研究生学报
242）年
2
月第
34
卷第
2
期
JMep
Posf
a,
VoL34,
No.2,
FeXmuy,
242）・127・软件进行统计分析,定量资料以均值土标准差（云土s
t
增加,NLRP3表达量先上升后下降tre
3.5天达到
表示，各组间均值比较采用单因素方差分析,两两组
峰值，与dpc
02天和dpe
7.5天比较差异有统计学
间比较采用LSD检验，以PW0.25为差异具有统计
学意义0意义（戶<0.01）,见图402结
果22
NLRP3在人子宫内膜不同时期的表达情况
免疫组化结果显示，在蜕膜期人子宫内膜中,可见大
量NLRP3阳性细胞，细胞质棕黄色深染，主要在子
宫内膜蜕膜化的间质细胞及上皮细胞中；且较增殖
期子宫内膜,蜕膜期NLRP3的表达量显著上升，见
图4
Western
blai结果所示,人蜕膜期子宫内膜较
增殖期
NLRP3
显著高表达,见图
20a：增殖期;b蜕膜期c间质;av腺上皮图1免疫组化检测人增殖期及蜕膜期子宫内膜中NLRP3
的定位及表达（X220）Figure
1
Locclizahon
and
expression
of
NLRP3
in
human
proliferohvv
anddehnuai
eudometrinm
by
immu-
nohistochemish'y（
x200）1
2相对分子质量Anti-NLRP3110000Anti-p-actin420004增殖期；：蜕膜期图2人增殖期及蜕膜期子宫内膜中NLRP3蛋白表达水平Figure
2
NLRP3
petein eepression
IcvvUs
in
human
prylif-
eryhvv
and
decinuai
eudometrinm22
NLRP3在小鼠妊娠早期子宫内膜中的表达情
况
免疫组化结果所示,NLRP3在小鼠妊娠早期上
调,dpe
32天表达最高，可见大量NLRP3阳性细胞
表达，细胞质棕黄色深染，而后下降，见图3。West-
em
blai结果所示,在小鼠妊娠早期,随着妊娠时间a-d：分别为小鼠交配后见栓02、I2、32、《2 d子宫内膜s
：间质；ae
：腺上皮；ie:腔上皮图示dye
32天NLRP3表达最高图3免疫组化检测小鼠孕早期子宫内膜中NLRP3的定位
及表达（X200）Figure
3
Locdization
and
eupression
of
NLRP3
in
mouse
eudometrinm
during
the
erst
trimestee
detectet
by
immunohistochemistry（
x220）0.5
1.5
2.5
3.5
4.5
5.5
6.5
7.5
（d）相对分子质量Anti-NLRP3Anti•卜actin*
卩<0.25,
*
*
P<0.21图4小鼠孕早期子宫内膜中NLRP3蛋白表达水平Figure
4
NLRP3
protein
expression
levvl
in
mouse
eedo-
metrinm
during
the
first
trimestee22
干扰NLRP3表达对蜕膜化的影响
转染PN-
LRP3
后
NLRP3
mRNA
水平较
PNC
下调
65%。PN-
LRP3的PRL表达量较CNC明显下降（P<0.01）,见
图
50
-122
-«熨赧衣卩沖长VNMEcodM医学研究生学报
2021
年
2
月第
34
卷第
2
期
J
Med
Posh-,
Vol.34,
No2,
FePAup,
2021»旳幣友BIJI-长
VNorwl—NJ—Mdaca：qRT-PCR检测SiNLRP3干扰效率；：各组细胞培养液上清中dPRL；;：qRT-PCR检测细胞PRL
mRNA水平相对表达量*
P<225,
*
*
P<221图5下调NLRP3后各组催乳素的表达水平Figure
5
Expression
leveO
of
prolactin
in
ecch
group
after
down-reyulahon
of
NLRP322
NLRP3在间质细胞蜕膜化过程中的表达水平
Westeu
blct结果所示,随着诱导人间质细胞蜕膜化
化是一个复杂的生理过程，受到多因素的调控，包括
激素、细胞因子、炎症因子等。他们之间复杂的相互
时间延长,NLRP3及caspase-S表达量显著升高。与
12
h
NLRP3、caspase-S
蛋白表达量(1.76
±0.24、
128±022)比较,0
h(120±021、028±0.01)明显降
作用促进了蜕膜化的过程，间质细胞获得上皮样特
征，如扩增的细胞质和粗面内质网，更大的分泌能
力，连接蛋白的表达增加，以增加细胞间通讯，为胚
胎植入及其生长发育创造了有利环境[2]0子宫内
膜间质细胞蜕膜化决定了子宫内膜对胚胎信号的响
低,24
h(
226
±0.23、5
95
±0.05)明显升高(P<
025)
o
见图
6o应,在胚胎生物信号传感、选择和植入过程都发挥了
Oh
12h
Anti-Caspase
124h
48
h相对分子质量至关重要的功能[14]0在生殖组织中，类固醇(如孕
酮和雌二醇)和局部细胞信号分子(如细胞因子)具
51000110000Anti-NLRP3有免疫功能。在一些研究中，已报告雌二醇-170和
Anti-p-Actin42000孕酮分别在多个器官中具有促炎和抗炎功能[15]0
近年来，子宫内膜炎症和免疫反应在胚胎植入中的
■他
衣ffi•mM友semEH如
作用逐渐被人们所探讨，越来越多的证据表明炎症
的平衡在调节蜕膜化中的重要性。NLRP3属于NLRs蛋白家族成员，一旦激活，会
图2诱导间质细胞蜕膜化过程中NLRP3表达情况Figuro
2
NLRP3
expression
during
induction
of3讨
论要。为了使子宫内膜变得易于接受，间质细胞必须
分化为能够分泌胚胎存活和胎盘发育所需要因子的
蜕膜细胞，该过程称之为间质细胞蜕膜化[11]0蜕膜edmNoh与
5
h
比较，*P<521；与
12
h
比较,#P<525Tasedse招募衔接子和Caspase-S组装到炎症小体上,然后通
过活化Caspase-S对细胞因子ILV0前体和IL-15前
体进行剪切，使之形成成熟体并分泌到细胞外发挥
炎症反应功能。已有文献报道，与可育女性相比,
RIL患者的子宫内膜样本显示NLRP3明显减少，这
mai
decinualization表明可能与植入问题有关[I0]o本课题组首次系统
性研究NLRP3在人子宫内膜中的表达，发现人蜕膜
期内膜NLRP3的蛋白较增殖期显著升高。我们对
内膜组织进行免疫组化染色，定位NLRP3的潜在功
子宫内膜容受性对于建立和维持妊娠十分重
能细胞。读片显示:在人蜕膜期的子宫内膜组织中,
间质细胞的NLRP3染色均呈现上升趋势。为了研
究NLRP3在围种植期的潜在作用，本研究利用小鼠
妊娠模型，检测其妊娠早期子宫内膜中NLRP3的
医学研究生学报
242)年
2
月第
34
卷第
2
期
J
Me Postffla, Vol.34 , No.2 , FeSruara , 242)-125 -表达情况,发现NLRP3蛋白在ddcd.5~2.5主要表 达于子宫内膜腔上皮及腺上皮,dpc3.5子宫间质细 步促进胚胎粘附/血管发生，有利于妊娠事件的发 生J2]o而在妊娠的中期,抗炎因子过程占主导地 胞中NLRP3表达量增加，ddc4.5~3.5 NLRP3主要 表达于蜕膜化的间质细胞中,且表达量随妊娠天数 增加逐渐上升。NLRP3蛋白在小鼠子宫内膜两种 位,防止母体对胎儿的排斥,维持平衡妊娠。妊娠后 期,促炎过程又占据主导,胎盘、血管一过性分泌大 量促炎因子,促进子宫收缩,利于分娩胎儿。NLRP3在胚胎-母体界面具有双重作用,母体子 细胞的表达总量在胚胎种植窗口期(dpc3.5)达到高 峰(P<5.55),而后逐渐下降。我们推测,NLRP3在 宫内膜中的持续血管生成需要IL18,但是IL15的过 小鼠妊娠早期于子宫内膜上皮细胞的表达,可能上 表达可能有助于增加自然杀伤细胞的局部募集和活 皮细胞发生上皮间质转化过程相关。子宫内膜腔上 化,从而导致种植失败[15]o因此我们猜测,NLRP3 皮细胞是胚胎着床过程的第一道屏障,随着胚胎接 触子宫内膜的过程,上皮细胞屏障被破坏,伴随着结 构和功能的变化，并且会分泌特异性蛋白来调节子 宫内膜间质细胞的蜕膜化过程。因此,在某种因子 的介导下,NLRP3的表达定位由上皮细胞逐渐趋向 于发生蜕膜化的间质细胞中0类固醇介导的蜕膜作用可以平衡母胎界面的促 炎和抗炎反应[5],为了探究NLRP3在子宫内膜间 质细胞中的表达是否具有意义，因此本研究通过8- Br-eAMP和MPA联合诱导构建体外蜕膜化模型,在 短时间内诱导T-HESCs蜕膜化〔则,以探究NLRP3 是否受雌孕激素诱导并参与间质细胞蜕膜化过程。 人体子宫内膜中,间质细胞蜕膜化相关的形态表现 大约出现在排卵后9d[14]o本研究发现了蜕膜化的 T-HESCs的上皮样改变,并且在蜕膜化的过程中 NLRP3表达上调。上述研究提示，炎症小体NLRP3 参与在正常妊娠的蜕膜化过程中。为了进一步探讨 NLRP3是否在间质细胞蜕膜化过程发挥作用,本研 究利用NLRP3 PUNA转染T-HESCs,然后联合8-Bu cAMP和MPA诱导其体外蜕膜化，结果表明干扰 NLRP3明显降低了蜕膜化标志物PRLmRNA的表 达和PRL蛋白的分泌。以上结果提示NLRP3受雌 孕激素调控,参与子宫内膜间质细胞蜕膜化过程。在胚胎早期种植中,促炎过程占主导地位，子宫 内膜发生MET过程中，分泌大量炎症因子。免疫细 胞、炎症介质和炎症因子共同构成的子宫内膜“免 疫微环境”，不但促进蜕膜化发生，还为胚胎种植提 供种植土壤。当胚胎着床后,滋养层细胞将突破子 宫内膜上皮细胞和间质细胞的屏障,相应植入部位 的子宫内膜组织要发生修复和重塑,类似于“损伤/ 愈合”，局部将发生剧烈的TH1型免疫反应,白血病 抑制因子LIF,白细胞介素IL-2/E,单核细胞趋化蛋 白N以及肿瘤坏死因子n等参与此过程,从而进一 在早期妊娠阶段，子宫内膜中的表达定位及水平的 异常可能与异常的细胞因子IL10、IL18等影响血管 生成和组织重塑有关 从而影响间质细胞蜕膜化过 程中催乳素的表达。NLRP3在子宫内膜“窗口期” 的高表达 提示 NLRP 触发的炎症通路能为提高子 宫内膜容受性提供新的治疗靶点。综上所述,截止投稿，本研究首次发现并证实了 NLRP3可促进间质细胞蜕膜化过程中dPRL的表达 和分泌,为研究NLRP3在子宫内膜围种植期调控间 质细胞蜕膜化奠定基础,为下一步研究子宫内膜容 受性及胚胎着床调控机制提供新的思路。【参考文献】[1 ] BovrUico A , Ahmad SF , Lachhad A, et a. Resulatiov ofmatou and angiopesesis meSiatou in a functiova) model of decin- ualizeS esdometual stroma) cells [ J ]. Reprod BiomeS Online) 2512 , 32(1) ： 35-45.[2] Sang Y , Li Y , Xu L, et al. ResulaUru mechanisms of esdometri-a) decinualizatiov and preanadcy-related diseases [ J ]. Acta Biochim BUpPps Sin , 2525,52(2) ：155N15.[3 ] Yang JH , Ches CD , Chon CH , et al. Intentiova) esdomeUia) injura increases emOryo implantation potesUals throuph esdanceS esdomeUia) angioaepesisPagaer[ J]. Biol Reprod,2512,125( 2): 331-339.[4] Huang JY , Yu PH , Li YC , et al. NLRP2 covtuOutes to in vitro Uecidualizatiov of esdometria) stroma) cells [J]. Reprod Biol En- daUnP,2512,15(1) ：66.[5 ] Salkor M, TeSlesdura G, Molodkiv M, et a. Natural selecdov of human emOryos: impaired Uecidualizatiov of esdometuum disa- blos emOryo-materual interactions and causes recarrest presnancy loss[J]. PLod One,2515,5(4) ：515287.[6] Davis BK, Wen H, Ting JP. The iniammasome NLRs in immunity ,inOammatiov: and associated diseases [ J ] ■ Annu Rev Im- muuoi,2511,25：377-435.[7] Kelly P, Meade KG, O'FarreXy C. Nod-canovicai InOammasomo- MeSiated IL-12eta Production Oy PUmary EndomeUia) Epithelia) and SUoma) FiOrodlast Celts Is NLRP3 and Caspaso-2 Depepdept -1 3 3 -医学研究生学报1年2月第34卷第2期 JMep Posf a, VoL34, No.5, FeCutm,1Stress ant UneVdet Protein Resposso os the meammaUry re- sposso in extometuai stromat cells [ J ] • Sci Rep, 2213,8(1)： 122742[J]. Frost Immut(t,2519,1 0:e50.[8 ] Zhao G, Jianf K, Yanf Y, p ai The PotenOal Theratextie Rote of miR-223 in Bovine EndometUtis by TaraetRf the NLRP3 It- eammasome[ J]. Front Immunoi, 2513,9：1916.[11 ] CasUe-Leyva V , Zaya-ClaveRma V , Espejel-Nunez A , p ai De- citualizaUos MePiateP by Steroid Hormoues Mofulates the Innate [9] Teuiati C , D''Ippolito S , Di NichcOo F, p ai Recorrent prec- nancy loss is associates io leaky aut: a novel pathoaexie motel of ecdomeUium ineammatios ? [ J ] J Trans； Met: 2213 , 16 ( 1 )： 122.[10] Brosexs JJ, Hayashi N, White JO. Profesterose 10(2x01 reau- ImmuniR in Resposse to Group B SUeptococcal Infectiou in vitro [J]. Gyyecf Obstet Invest, 2017,82(6) ：560-605.[16] Noyes RW, Hertig AT, Roch J. RepUnt of： Datinf the Endome-tuai Biyhy[J]. FeuO SteUi,2019,112(4 Suppl1) ： deciduai prolactin expressiou in diNerextiatina human exto- metuai stromat cells [ J] ■ £—02X00/,1999,144 ( 10) ： 4355[7 ] AlCotas-Reig J, Esteve-LalverUe E, Ferrer-Lliveras R, p aiTumor Necrosis FactcuAlpha and Precnancy: Focos os BicOovics. 4822[11 ] Oestreich AK, Chatchat SB , Popli P, p ai The auUphayy yese Atyl9L1 is necessary for ecdometrial decidualizatios [ J ] ■ Entc- 001—0/ s 2222,161 (1) ： bqz039.[4]覃金春，蒋凌云,靳玉甫,等•过氧化氢对蜕膜化小鼠子宫内膜 基质细胞的影响[]•医学研究生学报,2017,30(2) ：122C25•[11] 黄晨恺,可 丛，朱 萱•炎症小体活化与非病毒性肝病的研 究进展[J] •医学研究生学报,2217,30(5) ：546-550.[14] Grasse E, Gon S, Soczewski E , p ai Impact of the ReScolar At UpdateP ant ComprePepsive Review [ J ]. Clin Rev Alleray Immunf,2017,53(1) ：29-35.[8 ] Letee N , Chaouat G, Serazin V, p ai Endometriai vascolaUty by three-6imepsioual power Doppler ultrasouut ant cytoSines: a complemectary approach to assess uterine receptivity [ J ]. J Re- proS ImmtvV,2008,77( 1) ：57-62.(收稿日期：2525L7L7 ；修回日期：2525L9L7)(责任编辑:杨建鑫；英文编辑：彭世富)
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