2024年3月11日发(作者：)
植物组织中还原糖含量的测定
应用化学1101
A20110001
程志永
植物组织中还原糖含量的测定
程志永
（东北农业大学理学院应用化学系，哈尔滨，150000）
摘要：本实验以葡萄糖为标准，以3,5- 二硝基水杨酸(DNS)作显色剂，用分光光度法
测定黄瓜中还原糖的含量。在碱性条件下，3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕
红色的3–氨基–5–硝基水杨酸，该物质在540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，
还原糖的量与棕红色物质的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖
量。
关键词：还原糖；分光光度法；3,5-二硝基水杨酸
中图分类号：Q5-33
文献标志码：A
引言
DNS 比色法的原理是：3,5-二硝基水杨酸在碱性溶液中被还原糖还原成氨基化合物，
在沸水浴中显色时间5min，波长在540nm下有最大吸收峰。试验过程中的诸多因素如吸收
光谱、显色剂用量、显色时间等均对测定结果的准确性有直接影响。因此，我们对用3,5-
二硝基水杨酸比色法测定马铃薯块茎还原糖含量的反应条件进行了一系列的试验，试图摸索
最佳的试验条件以保证试验的精确度，以期获得可靠的数据为黄瓜品质育种的实践提供参
考。
1 材料与方法
1.1 实验材料
1.1.1 供试药剂
3,5-二硝基水杨酸；蒸馏水；葡萄糖溶液。
1.1.2 供试植物材料
黄瓜0.96g
1.2 实验方法
1.2.1 葡萄糖标准曲线的制作
称取0.0502g葡萄糖，定容至500ml；吸取葡萄糖标准液0、0.20、0.30、0.40、0.60、
0.80mL，分别置于10mL试管中，编号1、2、3、4、5、6，各加蒸馏水使体积为1.0mL，再
加苯酚试液0.51mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸2.5 mL，摇匀后放置5min，置沸水浴中加热约
15min，取出后冷却至室温。以一号试管为对照组。用721分光光度计，1cm比色皿，在490nm
处测定吸光度，绘制葡萄糖浓度-吸光度工作曲线。
1.2.2 样品中还原糖含量的测定
1.2.2.1还原糖的提取
准确称取样品0.5g，用少量蒸馏水研磨成匀浆，然后加入蒸馏水定容至50mL，摇匀，
置于50℃恒温水浴中保温10min，使还原糖浸出，移入离心管，4000r/min下离心10min，
取上清液。
1.2.2.2显色和比色
取4支试管，编号，按表1所示加入待测液和显色剂。
表 1 还原糖的显色和比色
管号
1
2
3
0
还原糖待测液（mL）
2.0
2.0
2.0
0.0
蒸馏水（mL）
0.0
0.0
0.0
2.0
DNS(mL)
1.5
1.5
1.5
1.5
摇匀后，沸水浴保温5min，冷却至室温，分别定容至25mL，在540nm下进行比色。
2 结果与分析
2.1 葡萄糖标准曲线
2.2 还原糖含量测定
通过对黄瓜中还原糖含量的测定，得出结果如表 2
表 2 黄瓜中还原糖含量
管号
吸光值A
平均吸光值A
还原糖含量（%）
1
0.407
2
0.403
0.399
1.7%
3
0.386
3 讨论
（1） 研磨黄瓜时，黄瓜皮不容易研磨，应尽量选择黄瓜肉。
（2） 在50℃水浴时间要足够，否则会影响还原糖的测定。
（3） 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
4 结论
利用3,5-二硝基水杨酸比色法测定马铃薯还原糖含量，发现本实验方法比较方便快捷、
安全、准确、低成本 DNS 比色法，适合于植物还原糖含量的批量和定量测定。
参考文献
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