2024年4月19日发(作者：)

Solarbio

动态显色法内毒素检测鲎试剂盒使用说明书

：T7570

：48T/盒1.7ml

：阴凉处，最佳2-8ºC，避光保存。

鲎试剂为鲎科动物东方鲎的血液变形细胞溶解物的冷冻干燥品, 鲎试剂中含有Ｃ因子、Ｂ因子、

凝固酶原、凝固蛋白原等。在适宜的条件下(温度，pH值及无干扰物质），细菌内毒素激活C因子，

引起一系列酶促反应，激活凝固酶原形成凝固酶，凝固酶分解人工合成的显色基质，使其分解为多

肽和黄色的对硝基苯胺（pNA，λmax=405）。反应液的吸光度(OD值)增加, OD值增加的速度与内毒

素浓度成正相关。换言之，OD值上升某一预设限值(启动OD)所需要的时间(定义为启动时间)与内

毒素浓度成负相关，启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系，据此，可以定量供试品的内

毒素浓度。

内毒素工作标准品、鲎试剂、显色基质、细菌内毒素检查用水、除热原试管、除热原吸头、除

热原96孔微板（或可拆式板条）、旋涡混合器、移液器、试管架、带温育系统的动态光度测定仪器

及配套软件，例如，微板鲎试仪ELx808及软件TALgent 或Gen5。

① 该试剂盒用于体外细菌内毒素的定量检测，严禁试剂以任何途径进入机体。

② 接触试剂及供试品的所有器皿必须是除热原的。试验过程应防止微生物的污染。

该说明书中的除热原指内毒素浓度小于0.005 EU/ml。

③ 供试品的pH值应在6.0 – 8.0之间，若超出此范围，需用除热原的缓冲液、0.1M氢氧化钠或

0.1M盐酸调节。

④ 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时，须进行干扰试验，参见【供试品的干扰试验】。

1、动态光度测定仪器的设定，以鲎试验微生物快速检测系统ELx808IU为例：

预热仪器，设置温育温度为37ºC。

设置模板及程序。

设定读板波长为405nm，设定动力学参数：读板120分钟， 每30秒读一次。

2、内毒素标准溶液配制（浓度10，1，0.1，0.01EU/ml）

2.1、取内毒素工作标准品1支，用砂轮沿安瓿颈部划痕，开启，加入适量（建议在0.5 ml - 1.2

ml之间）细菌内毒素检查用水，置旋涡混合器上剧烈振摇5分钟。

2.2、将上述内毒素溶液进一步用细菌内毒素检查用水稀释成所需浓度，每稀释一步均应在旋涡

混合器上剧烈振摇1分钟。

稀释的内毒素溶液静置时间超过10分钟，用前在旋涡混合器上剧烈振摇1分钟，放置4小时

以上的内毒素溶液应丢弃。

(参见《内毒素工作标准品使用说明书》)。

第1页，共2页

3、阴性对照为细菌内毒素检查用水。

4、鲎试剂的溶解：按标示量加细菌内毒素检查用水于显色基质中，轻轻摇晃溶解显色基质，再

将溶解的显色基质全部加入到鲎试剂中，轻轻摇晃使鲎试剂完全溶解。注意不要用旋涡混合

器剧烈振摇。溶解的鲎试剂应在10分钟内使用。

若采用多道移液器，将溶解的鲎试剂转移到除热原加样槽，并轻轻摇匀。

5、实验操作

取除热原微板，在各孔中分别加入100μl细菌内毒素检查用水、内毒素标准溶液，或供试品。

将微板放置于鲎试验微生物快速检测系统ELx808IU中，37ºC预热10分钟。

预热结束，用移液器或多道移液器每孔加入100μl 鲎试剂（避免产生气泡!)，中速振摇10秒混

匀，于37ºC温育120分钟，并且在405nm波长处，每30秒读一次OD值。

6、数据处理

设定启动OD为0.2，软件自动给出其启动时间(T)。

建立标准曲线：lgT = b lgC + a，其中T为启动时间，C为内毒素的浓度，b为直线斜率，a为Y

轴截距。

当实验数据同时满足如下三个条件时实验才有效：

① 标准曲线的浓度点≥4，标准曲线的相关系数r ≤ -0.980，

② 标准曲线最低点的T值小于阴性对照的T值，

③ 供试品平行管的平均值在标准曲线的区间内。

【供试品的干扰试验】

① 当对新药或无内毒素检查项的品种建立内毒素检查法时，必须进行干扰试验；

② 当鲎试剂、供试品的来源、配方、生产工艺改变，或试验环境中发生了任何有可能影响试验

结果的变化时，必须重新进行干扰试验；

③ 当供试品中可能存在鲎试验的干扰物质时，须进行干扰试验。

步骤如下：

1. 选择标准曲线中点或一个靠近中点的内毒素浓度（设为λm），作为供试品干扰试验中添加的

内毒素浓度，如采用标准曲线为10，1，0.1，0.01EU/ml系列时, 可以用供试品配制0.1EU/ml

内毒素浓度作为实验的供试品阳性对照。

2. 用供试品溶液配制浓度为λm的内毒素溶液（即含λm内毒素的供试品阳性对照），测量出该

溶液的内毒素浓度, 称为Cs；

3. 测量出未添加外源内毒素的供试品溶液内毒素浓度, 称为Ct；

4. 计算该试验条件下的回收率R ＝（Cs–Ct）/λm × 100％

5. 当R在50％～200％之间，则认为在此试验条件下供试品溶液不存在明显干扰作用。

6. 当R在50％～200％之外，需对供试品进行系列稀释或进行其它处理消除干扰, 每一稀释溶液

都重复步骤2-4, 直到内毒素的回收率R在50％～200％之间。选择回收率R最接近100％的

稀释倍数进行内毒素检测。

(参见《中华人民共和国药典》2010版中《细菌内毒素检查法》)

第2页，共2页