2024年6月1日发(作者：)

一

３３一　中国动物检疫２０１０年第２７卷第２期　

猪轮状病毒ＧＤ株ＶＰ６基因的克隆及序列分析　

田小艳，邓雨修，孙华，苏润环，王东东，宋延华　

（广东省温氏集团研究院，广东新兴　５２７４００）　

摘要：参考ＧｅｎＢａｎｋ中发表的ＰＲＶ　０ＳＵ毒株ＶＰ６基因核苷酸序列ＯＲＦ两端保守区序列，设计１对特异引物，以　

ＰＲＶ　ＧＤ株反转录ｃＤＮＡ为模板，通过ＰＣＲ方法扩增出长约１．４　ｋｂ的基因片段，并克隆到ｐＭＤＩ８－Ｔ载体中进行序列测　

定。测序结果表明：ＶＰ６基因全长１　３２０　ｂｐ，含有一个１１９４ｂｐ的开放阅读框，编码３９７个氨基酸。与国内外已知的ｌ１　

个毒株ＶＰ６基因的核苷酸及其推导的氨基酸序列比较，同源性分别为７６．５％一９５．６％和８８．７％一９９．２％；核苷酸系统发育　

进化树结果表明，ＧＤ毒株与轮状病毒ＪＬ９４，ＣＮ８６，ＯＳＵ毒株亲缘关系较近，为一个进化群。　

关键词：猪轮状病毒；ＶＰ６基因；克隆；序列分析　

中图分类号：￥８５２．６５９．４　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５－９４４Ｘ（２０１０）０２—００３３—０３　

ｓｅ　吼Ｉ∞Ａｍｌｙｍ　ｏｆ　ＶＰ６　Ｇ衄ｅ　ｏｆ　Ｐｔａ＇￣ｉ￣Ｒｏｍｖｉｎｍ　ＧＤ　Ｓｔｍｉｎ　

ＴＩＡＮ　Ｘｉａｏ—ｙａｎ，ＤＥＮＧ　Ｙｕ．ｘｊｕ，ＳＵＮ　Ｈｕａ，ＳＵ　Ｒｕｎ－ｈｕａｎ，ⅥｒＡＮＧ　Ｄｏｎｇ．ｄｏｎｇ，ＳＯＮＧ　Ｙａｎ－ｈｕａ＊　

（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｗｉｎ’Ｓ　Ｇｒｏｕｐ　Ａｃａｄｅｍｙ，Ｘｉｎｘｉｎｇ　Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ．５２７４００　Ｃｈｉｎａ）　

Ａ鼬曩ｃＩ：Ａ　ｐａｉｒ　ｏｆ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ　ｒｅｇｉｏｎ　ｆｌａｎｋｉｎｇ　ｔｈｅ　ＯＲＦ　ｏｆ　ＶＰ６　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｏ—　

ｔａｖｉｒｕｓ（ＰＲＶ）ＯＳＵ　ｓｔｒａｉｎ　ｗａｓ　ｄｅｓｉｇｎｅｄ　ａｃｃｏｒｄｉｎｇ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ．Ａ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｏｆ　ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅｌｙ　

１　４００ｂｐ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｉｆｅｄ　ｆｒｏｍ　ｃＤＮＡ　ｏｆ　ＲＶ　ＧＤ　ｓｔｒａｉｎ．Ｔｈｅ　ＰＣＲ　ｐｒｏｄｕｃｔ　ｗａｓ　ｉｎｓｅｒｔｅｄ　ｉｎｔｏ　ｐＭＤ　１　８一Ｔ　ｖｅｃｔｏｒ　ａｎｄ　

ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｔｌ１ｅ　ｆｕｌｌ—ｌｅｎｇｔｈ　ＶＰ６ｇｅｎｅ　ｃｏｎｔａｉｎｅｄ　１３２０ｂｐ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ａ　ｃｏｄｉｎｇ　ｒｅｇｉｏｎ　ｏｆ　１　１９４ｂｐ．ｗｈｉｃｈ　ｅｎｃｏｄｅｓ　ａ　ｐｒｏ—　

ｔｅ　ｏｆ　３９７　ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ．Ｔｈｅ　ＶＰ６　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｉ　ＧＤ　ｓｔｒａｉｎ　ｓｈａｒｅｄ　７６．５％－９５．６％ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｎｅｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅ．　

ｑｕｅｎｃｅｓ　ａｎｄ　８８．７％—，９９．２％ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｏｓｅ　ｏｆ　ｌｌ　ＲＶ　ｓｔｒａｉｎｓ．Ｔｌ１ｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ＧＤ　ｉｓｏｌａｔｅ　ｉＳ　

ｍｏｒｅ　ｓｉｍｉｌａｒ　ｔｏ儿９４、ＣＮ８６　ａｎｄ　ＯＵＳ　ｉｎ　ｇｅｎｅ　ｔｙｐｅ．　

Ｋ盯ｗ呻ｄＩ：ｐｏｒｃｉｎｅ　ｒｏｍｖｉｒｕ（ＰＩ　）；ＶＰ６　ｇｅｎｏｍｅ；ｃｌｏｎｉｎｇ；ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　

轮状病毒（Ｒｏｔａｖｉｒｕ，ＲＶ）是呼　

１材料和方法　

１．５轮状病毒ＶＰ６基因的扩增　

肠孤病毒科轮状病毒属的成员，是各　

１．１　病毒　

按Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒说明的方法，　

种幼龄动物非细菌性腹泻的主要病　

猪轮状病毒为本实验室从广东　从病毒培养液中提取病毒基因组　

原之一［１］。我国猪轮状病毒ＰＲＶ感染　

某规模化猪场分离获，猪轮状病毒从　

ＲＮＡ，按１０Ｉｌ　Ｌ反转录体系进行反转　

非常普遍，感染后，使仔猪机体免疫　

广东分离获得，病毒经ＫＭ０４细胞培　录，ＲＴ—ＰＣＲ反应参照试剂盒说明书进　

力急剧下降，从而诱发多种腹泻病原　

养，第６代毒用于本研究。　

行，同时设立阴阳性对照．．　

体混合感染，导致仔猪死亡率上升，　１．２载体与菌株　

１．６　ＰＣＲ产物克隆与鉴定　

或生长缓慢、停滞［２］。　

ｐＭＤ１８一Ｔ购自Ｔａｋａｒａ公司，大肠　

所得阳性扩增产物经纯化后克　

ＶＰ６是ＲＶ唯一的内衣壳蛋白，由　杆菌（ＤＨ５　ａ）本实验室保存。　隆到ｐＭＤ１８－Ｔ载体中，转化大肠杆菌　

基因片段６编码３９７个氨基酸，约占　

１．３试剂和工具酶　

ＪＭ１０９，提取质粒，经酶切和ＰＣＲ鉴定　

病毒蛋白总量的５１％。ＶＰ６是重要的　

Ｔｒｉｚｏｌ试剂盒购自大连宝生物　

为阳性样品后，送往宝生物工程（大　

表位标志，具有免疫原性和抗原性，　

工程有限公司；ＤＮＡ胶回收试剂盒，质　

连）有限公司测序。利用ＤＮＡＳｔａｒ软　

是ＲＶ的群抗原和亚群抗原，同一血　

粒快速提取试剂盒均购自美国Ｏｍｅｇａ　

件对测序结果进行分析。　

清群具有共同抗原［３＿５］。在Ａ组轮状　

Ｂｉｏ—ｔｅｋ公司；ＤＮＡ　Ｍａｒｋｅｒ为北京鼎　１．７　ＲＶ　ＶＰ６基因序列的同源性比较　

病毒中，ＶＰ６蛋白基因在序列上具有　国生物技术有限公司产品。　用Ｂｌａｓｔ和ＤＮＡＳｔａｒ软件对　

高度的保守性，是诊断实验中检测到　

１．４引物　

ＧｅｎＢａｎｋ中ｌ１株ＰＲＶ的ｖＰ６全基因　

的主要抗原，所有Ａ群轮状病毒都具　根据Ｇｅｎｌ３ａｎｋ中ＰＲＶ核酸序列　序列进行同源性比较，并绘制基因系　

有共同的群特异性抗原ＶＰ６［　。　设计ｌ对ＶＰ６片段扩增引物。引物由　

统发育进化树。　

本研究通过对ＰＲＶ　６Ｄ　ＶＰ６基因　上海生物工程有限公司合成。引物序　２结果　

进行分析，从基因角度分析广东省流　

列、位置及扩增片段大小见表１。　

２．１　目的基因扩增　．　

行毒株与其他毒株间的关系，为探索　

该病毒的起源，分子流行病学特征和　

表１　ＰＲＶ　ＶＰ６基因ＲＴ－ＰＣＲ扩增引物　

抗原变异规律提供依据，也为研制疫　

苗奠定了一定的理论基础。　

面而　西　华　

ｎ物检疫２０１０年第２７卷第２期　．．３４．．　

细胞毒中提取病毒ＲＮＡ，用　

的方法扩增ＶＰ６基因，ＰＣＲ产　

ｉ＇　２　３　‘　５　ｉ　６　７　８　９　＇Ｏ　ｔｔ　１２　

＇■＿　９，，Ｏ　７６．６　７，．７　０９．２｝９ｏ．３　鲫ｏ　８７．＇　８ｅ２　７９．口　∞８　聃９　＇　

２％琼脂糖凝胶电泳分析，可见　

２｛９．５　７７．＇　７６．７　８５．ｅ　Ｉ８５卫　７７．７　８４　ｅ　８ｔ●　８０．２　０２．９　８３．●　２　

３　ｉ２ｅ．３　２７．６　８７，６　７６．５　ｌ　７６．５　∞，３　７７　ｏ　７６．９　７Ｂ．３　７７，３　７，．ｅ　３　

左右特异性的目的条带，大小　

●ｉ　２６　７　２ｅ．１　＇３．０　７６量ｎ．６．ｅ　∞Ｏ　，６　２　７７．４　ｅ　Ｏ　７７．６　”．ｅ　●　

结果一致（图１）。　

５　ｉ１１　ｅ　１簟ｅ　２＆０　２ｔ３　Ｉ＂　７５６　９ｎ５　口３．Ｏ　竹＇　∞３　９０　５　

●｛１０。５　１５ｅ　２搴．●　拍．Ｏ　２■＿　７９．４　∞．９　ｇ１　４　８２．４　髑．６　０９．９　●　

Ｉ　１　２　３　４　

７　ｉ　２３　５　篇．８　＇毫２　＇０．７　２‘．＇ｉ２４．３　，巍Ｏ　ｅ　２　ｅ１．８　７９．８　７９，８　７　

ｅ　ｉ１４．３　１７．３　２７．ｅ　２ｇ．Ｏ　１Ｏ．４｝１１．２　箱－０　●瞳＇　船７　∞．０　９●－９　ｅ　

●｝１３．Ｏ　１７．７　２＆０　２７２　，５｛ｇ．４　２３．２　１０．８　∞．２　∞．２　９０．Ｏ　９　

髓｝２３．７　２　２　２５．９　２３－６　１９，４；２ｏ．３　２１　４　１９９　＇９　２　Ｉ８２．６　８２．４　伸　

，’｝１４８　１９．７　２７．●　２６．粤　’Ｏ　７｛１１．５　２４１　１１．０　１０．８　２０．１　Ｉ　９５．８　＇＇　

＂１２　ｌ１４　７　＇ｇ．１　２６．６　２６．５　＇０．８｝１１１　２３．０　ｔ１．３　１０．ｇ　２０．３　●．６　Ｉ＂１２　

ｌ＇　２　３　●　５｛●　７　８　９　伯　１ｔ　１２　

表２不同ＰＲＶ毒株ＶＰ６基因相应核苷酸的同源性比较　

ｐｅｒｃｅｒｄＩｄｅ岫　

｝＇　２　３　‘　５　●　７　Ｂ　９　＇１ｏ　１ｔ　１２　

Ａ分子质量标准；１．２：样品；３：阳　

＇■＿　甜ｒ了　８１１４　∞＾９　轴．５　９７．２　９１　Ｏ　ｇ０．ｏ　帕Ｏ　０３　９７　７　９７　２　＇　

ｏｓｕ　

４：阴性时照　

２　５．２　柚．７　９＇．：　９５Ｏ　９３２　９１，２　９５－８　９４５　９７．ｏ　９　７　１１３．７　２　

Ａ４１１　・　

３　＂１　●．７　＿　９５　２　ｅ８，９　８８．９　¨７　们　４　∞Ｉ９　９＇．０　翻　２　∞，２　３　

８２２３　

Ｖ　ＶＰ６基因ＰＣＲ产物凝胶电泳分析　

●　＇０ｅ　９＇　４．７　舳．２　ｅ孽．２　９５５　ｅ　．７　ｅ９４　。１．，　¨．●　的．４　●　

ＢＭ３３　

果　

５　＇３　５．０　１１　７　＇１ｌ　Ｉ１１７．５　ｅ　９　９孽．２　孵７　９３　７　９＆Ｏ　９７．５　５　

ＣＮ８６　

‘　２６　６拿　１１．７　１１　４　２３　Ｉ　－ｔ５　９／＇．５　９７．５　ｇ２．５　９　２　∞，　ｅ　

ＣＲＷ－￥　

７　９４　９１　５　２　４．●　＇ｎｅ　１００　柏．５　９０．５　９２．０　∞．２　９ｎ２　７　

Ｄ０１１９８２２　Ｃｈｌｌｔ●　ＩＬ　

匡组质粒ｐ￣日）一ＶＰ６鉴定结果　

０　Ｏ．０　５．Ｏ　１１．１　１Ｏ．ｅ　０Ｓ　２．３　＇ｎ０　●曩２　９３．７　∞＿５　∞Ｏ　ｌ　

ＯＱ２０４７４１　ｌｎ埘●　

ＶＰ６的回收产物与与ｐＭＤＩ８一Ｔ　

●　Ｏ．ｅ　５．５　＇１　７　，’１　＇．０　２　３　’０．０　ｎ５　９３．２　９＆Ｏ　９７５　●　ＥＵ３７２７∞　

ｔ０　６．ｇ　２８　ｔｉｔ４　ｅ５　０．３　７．７　０．３　０．３　６．９　∞．０　９　Ｏ　＇Ｏ　

Ｏｏｌｌｆｄｅｄ　

接，构建了ｐ￣Ⅱ）一ＶＰ６重组质粒。　

＇１　Ｏ　６３　１＇．４　＇’１　１　ｅ　２．０　１０　３　＇３　’８　７．’　∞．２　＇’　

Ｉｓｏｌａｔ￣ｌ靠咖　

质粒进行ｔｔｉｎｄ　ＩＩＩ和Ｋｐｎ　Ｉ双　

１２　２　Ｂ　Ｂ．３　１１．４　＂１　２．３　３．１　１０，３　１　Ｂ　２　３　７ｔ　Ｏ．５　＿　＇２　

ＪＬ９４　

＇　２　３　●　５　０　７　Ｂ　●　伯　１１　＇２　

定，释放出长度约１４００ｂｐ和　

表ｌ３：￣ＮＰＲＶ毒株ＶＰ６基因所编码氨基酸的同源性比较　

拘片段；同时ＰＣＲ也扩增出　

目的片段与预期结果相符，证　

ＤＮＡ　Ｓｔａｒ软件将核苷酸同源性分析　

型上更为接近。而且，发现在收集的　

质粒ｐＭＤ—ＶＰ６构建成功（图２）。　

结果绘制系统发育进化树，并参照国　

毒株之间核苷酸同源性差异较大，但　

内外猪轮状病毒基因分群的方法，ＧＤ　氨基酸同源性却很高，说明ＶＰ６基因　

分离株属于Ａ群亚组Ｉ，这一结果也　

存在一定数目碱基的无意义突变，且　

一２　０

与同源性分析结果相吻合（图３）。　较为较普遍。　

ｉｓｏＩＯｔｅｄ　ｓｋａｉｎ　

ＪＬ９４　

ｏＱ２０４７４１　ｌｎｄｌａ　

ＣＮｅ６　

昆　心

竹　８∞盯”酣帕　

０　

　

ＥＵ３７２７６０　Ｔｈａｉｌａｎｄ　

ＣＲＷ－８　

咖　

Ｏ８Ｕ　

Ａ４１１　

Ｂ２２３　

ＢＲＶ０３３　

Ｄ０１　１９８２２　Ｃｈｉｎａ　

Ｏｏｌｆｒｔｅｄ　

Ｐ６基因的核苷酸序列测定以　

１５　１ｏ　５　Ｏ　

ＮｕｃｌｅｏＵｄａ　Ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎｓ　００）　

他毒株的同源性分析　

图３猪轮状病毒株系统发育进化树　

重组质粒进行序列测定，经比　

证明获得了ＲＶ　ＶＰ６蛋白的全　

３讨论　

对我国猪轮状病毒地方株ＧＤ　

，

共１３２０ｂｐ，含有一个１　１９４ｂｐ　

轮状病毒作为腹泻的主要病原，　

ＶＰ６蛋白基因进行克隆、序列测定和　

阅读框，编码３９７个氨基酸。　

给世界各国的畜牧业造成严重的经　

分析，这可以为毒株鉴定提供依据，　

取ＧｅｎＢａｎｋ上具有代表性毒　

济损失，我国猪轮状病毒感染非常普　也丰富了ＰＲＶ感染的分子流行病学　

ＲＶ　ＶＰ６全基因序列进行同源　

遍，ＶＰ６是病毒中含量最丰富的蛋白　资料，为进一步在分子水平研究猪轮　

。

结果显示（表２、表３），ＧＤ毒　质，它具有良好的抗原特异性，是很　

状病毒在广东省的流行、变异规律以　

发表的ｌｌ株国内外毒株序列　

好的诊断试剂。所有Ａ群轮状病毒都　

及主要结构基因的特性等奠定了基　

苷酸同源性在７６．５％一９５．６％之　

具有共同的群特异性抗原ＶＰ６。　础，也为猪轮状病毒的诊断及防治提　

中与ＪＬ９４株的同源性最高达　

本研究选用ＲＶ　ＧＤ毒株对ＶＰ６　供重要的物质基础。　

与Ｂ２３３株的同源性最低为　

全基因序列进行核苷酸和氨基酸同　

参考文献　

氨基酸的同源性在８８．７％一９９．　

源性比较，基因序列分析结果表明：　

［１］殷震，刘景华．动物病毒学［Ｍ］．　

，

其中与ＤＱ２０４７４１株的同源　

ＧＤ株ＶＰ６与代表株ＯＳＵ株ＶＰ６（亚群　第２版．北京：科学出版社，１９９７．　

达９８．５％，与Ｂ２３３株的同源性　

Ｉ）、Ｇｏｔｔｆｒｉｅｄ株ＶＰ６（亚群ＩＩ）核苷　

４５６—４６６．　

８９．２％。　

酸序列同源性分别为８６．８％和　

［２］宣长和，孙福先，朱战波，等．　

进…步分析广东流行毒株与　８２．４１６％，氨基酸序列同源性分别为　

猪病学［Ｍ］．第２版．北京：中国农业　

株在遗传进化上的关系，用　９７．７％和９３％，ＧＤ株与ＯＳＵ株在基因　

（下转第４ｌ页）　

一

４ｌ一　中国动物检疫２０１０年第２７卷第２期　

到组织中去，袁科平在对磺胺甲嗯唑　

相关国家或组织严格监控的药物品　

复方新诺明在鲈鱼体内的药物代谢　

在罗非鱼体内的药动学研究中也发　

种之一，ＦＤＡ、欧盟及我国农业行业标　

动力学研究［Ｊ］．海洋科学，２００１，　

现有这种现象嘲。在本试验中，肝脏、　准（ＮＹ５０７０—２００２）规定动物源食品中　

２５（２）：３５—３８．。　

血液和肌肉的消除速率常数Ｋｅ分别　

磺胺药的最大残留限量为０．１ｍｇ／　

［８］袁科平，艾晓辉．磺胺甲噫唑在　

为０．１４／ｈ、０．０３５／ｈ和０．０３１／ｈ，ＳＭ，　

ｋｇ；日本为不得检出。黑鲳肌肉作为　

罗非鱼体内的药代动力学及组织浓　

在肝脏中的消除速率常数远大于血　

可食性组织，若以０．１ｍｇ／ｋｇ残留标　

度研究［Ｊ］．水利渔业，２００８，２８　

液和肌肉，这与肝脏作为主要的代谢　

准，在（２Ｏ±２）℃水温条件下以《中华　

（３）：２５－２７．　

器官相一致。药物消除半衰期　

人民共和国水产行业标准．磺胺类药　［９］方星星．复方新诺明和恩诺沙　

（Ｔ１／２）是衡量药物在某种动物体内　

物水产养殖使用规范》推荐剂量口服　星在两种水产动物体内药代动力学　

消除速率的一个重要的固定常数，它　

磺胺二甲嘧啶的休药期为１４ｄ，肝脏　

及残留研究［Ｄ］．中国海洋大学研究　

只受药物本身性质的影响，而与药物　

中休药期为１５ｄ。由于动物年龄、健康　

生学位论文．青岛：中国海洋大学，　

的给与浓度无关［１２］。研究表明，同一　

状况、水温、水质等条件均可影响药　

２００３．　

种药物在不同的动物体内的消除半　物的消除速率，尤其是温度条件，对　［１Ｏ］杨秀娟，张曦．磺胺二甲嘧啶残　

衰期是不同的，在恒温动物体内的消　

水生动物体内的药物代谢消除影响　留检测方法的研究进展［Ｊ］．动物食　

除速度较快，而在变温动物体内的消　非常显著，因此在现实生产中要根据　

品与安全，２００４，（儿）：１７—１８．　

除速度则明显减缓［１３］。磺胺二甲嘧啶　药物使用情况和实际养殖条件灵活　

［１１］袁宗辉．磺胺药的比较代谢研　

在东北细毛羊体内的血浆消除半衰　

把握休药期。　

究［Ｊ］．中国兽药杂志，２００１，３５（５）：　

期为（４．６６３５±１．５３）ｈ，奶山羊的血　

参考文献　

４６—５１．　

浆消除半衰期为（４．７４±１．２９）ｈ［川，　［１］张海琪，宋刑刑，徐晓林，等．　

［１２］丁兴宇，刑孔庚，李琼才等．　

星布罗鸡的的血液消除半衰期为　液相色谱一串联质谱法同时测定大　三个参数对临床用药的指导意义　

（７．６５７３±１．８７１２）ｈ［１５］，猪的Ｔ１／２为　

黄鱼中２０种磺胺类药物残留［Ｊ］．　［Ｊ］．药物数理杂志，２０００，１３（３）　

：２４８—２４９．　

（１５．３２±１．４４）ｈ［，６３，银鲫的血浆消除　分析化学，２００７，３５（２）：２６８—２７２．　

半衰期为１２．９６１ｈ［￣１。而本文研究结　

［２］侯晓林，沈建忠，张素霞．鱼　

［１３］杨先乐，湛嘉，康继韬．氯霉　

果表明磺胺二甲嘧啶在黑鲳血液中　肌肉中磺胺二甲嘧啶及其代谢产物　

素在罗非鱼体内的代谢和消除规律　

的消除半衰期为１９．９７ｈ，消除速率较　的高效液相色谱法测定［Ｊ］．畜牧兽　

［Ｊ］．水生生物学学报，２００５，２９（３），　

２６６—２７１．　

恒温动物缓慢。ＳＭ　在不同动物机体　

医学报，２００５，３６（３）：２８８—２９１．　

内消除速度存在的差异可能与物种　

［３ｊ　ＪｏｅｌＥＨ，ＲｉｃｈａｒｄＤＬ，ＲｏｓｅＭＮ，　

［１４］孙长勉，于连智，张德新，等．　

ｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ　ｄｅｔｅｒｍｉ－　

磺胺二甲嘧啶在东北细毛羊体内的　

的进化程度有关，较高等的动物有较　

ｅｔ　ａ１．Ｌｉ

发达的药物排泄系统和器官，也有着　

ｎａｔｉｏｎ　ｏｆＳｕｌｆａｍｅｔｂａｚｉｎｅ　ｉｎ　Ｆｅｅｄ【Ｊ】．Ｊ　

代谢动力学研究［Ｊ］．沈阳农业大学　

完善的药物消除机制，进入体内的药　

Ａ　

学报，２００１，３２（１）：４８—５０．　

Ｏ　Ａ　Ｃ，１９８８，７１（５）：１０５４—１０５６．　

物可以通过肾脏进行主动消除，而使　［４］庄稼，迟燕华，李克安等．茜　［１５］赵秀然，李爱华，张渊魁．磺　

ＳＭ＇的消除速度明显加快；而较低等　

素红Ｓ与蛋白质的反应机理研究　

胺二甲嘧啶（ＳＭ２）在星布罗鸡体内代　

的水生动物则只能通过不完善的器　

［Ｊ］．化学学报，１９９８，５６（８）：８２７—　

谢动力学的探讨［Ｊ］．江西农业大学　

　

官对药物进行被动消除Ⅱ　，因此消除　

８３２．

学报，１９８６，８（４）：５５—６０．　

速率相对缓慢；ＳＭ２在黑鲳血液中的　［５］李佐卿，倪梅林，俞雪钧，等．液　［１６］陈杖榴，卢光志，刘建新．磺　

消除半衰期大于在银鲫血液中的消　相色谱一串联质谱法检测水产品中　胺二甲嘧啶在猪体内的代谢动力学　

除半衰期，这可能与黑鲳是一种冷水　磺胺类和喹诺酮类药物残留［Ｊ］．分　研究．华南农业大学学报［Ｊ］，１９８８，　

３）：４６—５０．　

性鱼类有关。通常水温每升高１℃，鱼　析测试学报，２００７，２６（４）：５０８—５１０．　

９（

　Ｊ　Ｆ　Ｍ，Ｇｒｏｎｄｅｌ　Ｊ　Ｌ，　

类的代谢和消除速度将提高１０％，黑　

［６］艾晓辉，陈正望．磺胺二甲嘧　

［１７］Ｎｏｕｗｓ

ｎｅｔｉｃｓ　

鲳生长环境温度较低，因此代谢会比　

啶在银鲫体内的药动血及组织残留　

ＳｃｈｕＲｅ　Ａ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉ

ｌｏｘａｅｉｎｉｎ　ｃａｒｐ，Ａｆｒｉｃａｎ　ｃａｔｆｉｓｈ　

较缓慢。　

研究［Ｊ］．淡水渔业，２００１，３１（６）：　

ｏｆｃｉｐｒｏｆ

５２—５４．　

３．２磺胺二甲嘧啶休药期的确定　

ａｎｄ　ｒａｉｎｂｏｗ　ｔｒｏｕｔ［Ｊ】．Ｖｅｔ—Ｑｕａｒｔ．　

　

磺胺类药物是ＦＤＡ、欧盟、日本等　［７］王群，孙修涛，刘德月，等．　

１９８８．ｔ０：２ｌ１．２１６．

（上接第３４页）　

ｎｓ　ａｎｄ　ｅｐｉｔｏｐｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｒｏｔａｖｉｍｓ　

［５］Ｄｅｓｓｌｂｅｒｇｅｒ　Ｕ，Ｍｃｃｒａｅ　Ｍ　Ａ．１１１ｅ　

ｄｏｍａｉ

ｒｏｔａｖｉｒｕｓ　ｇｅｎｏｍｅ［Ｊ】．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ　ｉｍ－　ＶＰ６　ｐｒｏｔｅｉｎ　［Ｊ］．Ｊ　Ｖｉｒｏｌ，２０００，　

科学技术出版社，２００３．２９—３２．　

１　１５７４—１　１５８０．　

［３３冯涛，刁有祥，马秀丽，等．轮状　

ｍｕｎｏｌ，１９９４，１８５（１）：３１—６０．　

Ｍ，Ｇｌａｓｓ　Ｒ　Ｉ，Ｌｅｂａｎｏｎ　Ｃ　

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