2024年6月8日发(作者：)

通过LAMP实现DNA的线性扩增

一、LAMP 原理

60-65℃是双链DNA复性及延伸的中间温度，DNA在65℃左右处于动

态平衡状态。因此，DNA在此温度下合成是可能的。利用4种特异引物依靠

一种高活性链置换DNA聚合酶。使得链置换DNA合成在不停地自我循环。

扩增分两个阶段。

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第1阶段为起始阶段，任何一个引物向双链DNA的互补部位进行碱基

配对延伸时，另一条链就会解离，变成单链。上游内部引物FIP的F2序列首

先与模板F2c结合，在链置换型DNA聚合酶的作用下向前延伸启动链置换

合成。外部引物F3与模板F3c结合并延伸，置换出完整的FIP连接的互补单

链。FIP上的F1c与此单链上的Fl为互补结构。自我碱基配对形成环状结构。

以此链为模板。下游引物BIP与B3先后启动类似于FIP和F3的合成，形成

哑铃状结构的单链。迅速以3' 末端的Fl区段为起点。以自身为模板，进行

DNA合成延伸形成茎环状结构。该结构是LAMP基因扩增循环的起始结构。

第2阶段是扩增循环阶段。以茎环状结构为模板，FIP与茎环的F2c区

结合。开始链置换合成，解离出的单链核酸上也会形成环状结构。迅速以3’

末端的B1区段为起点，以自身为模板。进行DNA合成延伸及链置换．形成

长短不一的2条新茎环状结构的DNA，BIP引物上的B2与其杂交。启动新

一轮扩增。且产物DNA长度增加一倍。在反应体系中添加2条环状引物LF

和LB，它们也分别与茎环状结构结合启动链置换合成，周而复始。扩增的最

后产物是具有不同个数茎环结构、不同长度DNA的混合物。且产物DNA为

扩增靶序列的交替反向重复序列。

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二、实验流程