2024年6月13日发(作者：)

中国动物传染病学报２０１０，１８（３）：３２—３７　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ　

・

研究论文・　

安徽省禽白血病感染的血清学调查　

及ｇｐ８５基因的扩增　

刘　迪　，赵圆圆　，丁　亮　，辛　伟　，李　郁　，魏建忠　，孙　裴　，　

秦爱建　，刘光清　，王桂军　

（１．安徽农业大学动物科技学院，合肥２３００３６；２．扬州大学兽医学院，扬州２２５００９；　

３．中国农业科学院上海兽医研究所，上海２００２４１）　

摘要：随机抽取安徽省３个肉种鸡场种鸡及３个地市农贸市场商品鸡的血清样本和泄殖腔拭子，采用　

ＥＬＩＳＡ进行鸡白血病检测，并对ｊ亚群鸡白血病病毒抗体阳性鸡群中病鸡的肝组织、全血及上毒细胞提取ＤＮＡ　

进行ＰＣＲ扩增和基因测序。检测结果表明，３个肉种鸡场中Ｊ亚群鸡白血病抗体阳性检出率分别为：Ｏ、　

７３．５０％和１５．２２％；３个衣贸市场商品鸡抗体阳性检出率分别为：１２．００％、２．２２％和９．１０％。３个肉种鸡场Ａ、　

Ｂ亚群鸡白血病的抗体阳性率分别为０、１７．９３％和１．０８％，ＡＬＶ抗原阳性率分别为２．１７％、１７．９３％和　

１５．２２％。ＰＣＲ检测结果表明，从可疑发病鸡的肝组织和全血中均能扩增出ＡＬＶ—Ｊ　ｇｐ８５特异性片段。结果证实　

安徽省鸡群中有ＡＬＶ—Ｊ感染，并呈不同程度的流行，应引起高度重视。　

关键词：禽白血病Ｊ亚群；血清学调查；ＥＬＩＳＡ；ＰＣＲ　

中图分类号：￥８５２．６５９．３　文献标识码：Ａ　文章编号：１６７４—６４２２（２０１０）０３—００３２—０６　

ＳＥＲｏＬｏＧＩＣＡＬ　ＩＮＶＥＳＴＩＧＡＴＩｏＮ　ｏＦ　ＡＶＩＡＮ　ＬＥＵＫＯＳＩＳ　ＶＩＲＵＳ　

ＩＮＦＥＣＴＩｏＮ　ＩＮ　ＡＮＨＵＩ　ＰＲｏＶＩＮＣＥ　ＡＮＤ　ＧＰ８５　ＧＥＮＥ　

ＡＭＰＬＩＦＩＣＡＴＩｏＮ　

ＬＩＵ　ｄｉ　，ＺＨＡＯ　Ｙｕａｎ—ｙｕａｎ　，ＤＩＮＧ　Ｌｉａｎｇ　，ＸＩＮ　Ｗｅｉ　，ＬＩ　Ｙｕ　，ＷＥＩ　Ｊｉａｎ—ｚｈｏｎｇ　，ＳＵＮ　Ｐｅｉ　，　

ＱＩＮ　Ａｉｊ—ｉａｎ　，ＬＩＵ　Ｇｕａｎｇ—ｑｉｎｇ　，ＷＡＮＧ　Ｇｕｉ－ｊｕｎ　

（Ｊ．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ａｎｉｍａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ａｎｈｕｉ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｅｆｅｉ　２３００３６，Ｃｈｉｎａ；　

２．Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｙａｎｇｚｈｏｕ　２２５００９，Ｃｈｉｎａ；　

３．Ｓｈａｎｇｈａｉ　Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＣＡＡＳ，Ｓｈａｎｇｈａｉ　２００２４１，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｔａｌ　４６０　ｓｅｒｕｍ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｒｅｅ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｆａｒｍｓ　ａｎｄ　ｔｈｒｅｅ　ｆａｒｍｅｒ’Ｓ　ｍａｒｋｅｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｕｓｉｎｇ　

ａｖｉａｎ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｔｉｂｏｄｙ／ａｎｔｉｇｅｎ　ＥＬｌＳＡ　ｋｉｔｓ．Ｔｈｅ　ＤＮＡ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｓｕｓｐｅｃｔ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　

ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｆｌｏｃｋｓ　ｗｉｔｈ　ＡＬＶ—Ｊ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｆｏｒ　ａｍｐｌｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＰＣＲ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　

ＡＬＶ—Ｊ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　Ｏ％．７３．５％ａｎｄ　１５．２２％ｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｆａｒｍｓ　ａｎｄ　１２％．２．２２％ａｎｄ　９．１％ｉｎ　

ｔｈｒｅｅ　ｆａｒｍｅｒ’Ｓ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｍａｒｋｅｔｓ．ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅ　ＡＬＶ—ＡＢ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　０．１　７．９３％ａｎｄ　１．０８％ａｎｄ　ＡＬＶ　

ａｎｔｉｇｅｎ　ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｒａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　２．１７％．１７．９３％ａｎｄ　１５．２２％ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ　ｉｎ　ｔｈｒｅｅ　ｂｒｏｉｌｅｒ　ｂｒｅｅｄｉｎｇ　ｆａｒｍｓ．Ｔｈｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｏｆ　

９５０　ｂｐ　ｆｏｒ　ｇｐ８５　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ＡＬＶ—Ｊ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｉｆｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｉｖｅｒ　ａｎｄ　ｂｌｏｏｄ　ＤＮＡ　ｓａｍｐｌｅｓ　ｏｆ　ｃｈｉｃｋｅｎｓ　ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ　ｏｆ　ＡＬＶ—Ｊ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ．　

Ｒｅｓｕｌｔｓ　ｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｔｈｅ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｅｖａｌｅｎｃｅ　ｏｆ　ＡＬＶ—Ｊ　ｉｎ　ｃｈｉｃｋｅｎ　ｆｌｏｃｋｓ　ｉｎ　Ａｎｈｕｉ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｖｉａｎ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｖｉｕｓｒ　Ｊ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ；ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ；ＥＬＩＳＡ；ＰＣＲ　

收稿日期：２０１０－０２－０９　

项目基金：农业公益性行业科研专项资助项目（２００８０３　１９）；安徽省教育厅自然科学基金资助项目（ＫＪ２００７Ｂ１７６）　

作者简介：刘迪，男，硕士研究生，预防兽医学专业　

通讯作者：王桂军，Ｅ—ｍａｉｌ：ｗａｎｇｇｕｉｊｕｎ＠ａｈａｕ．ｅｄｕ．ａｎ　

第１８卷第３期　刘迪：安徽省禽白血病感染的血清学调查及ｇｐ８５基因的扩增　３３・　

禽白血病病毒（Ａｖｉａｎ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ，ＡＬＶ）属　

于反转录病毒科中的禽反转录病毒属，可分为１０　

个亚群，主要对养鸡业有危害的是Ａ、Ｂ、Ｊ三个亚　

ＪＤ６８５），禽白血病ＡＢ亚群抗体检测试剂盒（生　

产批号０９２５７．ＭＤ４３４），禽白血病抗原检测试剂　

盒（生产批号为０９２５４一ＪＤ６８１）均购于北京爱德士　

（ＩＤＥＸＸ）元亨生物科技有限公司。　

１．４病料组织对来自３个肉种鸡场疑似血管　

瘤和内脏肿瘤的可疑病死鸡，采集肝脏肿瘤组织　

和全血，提取ｃＤＮＡ做ＰＣＲ扩增。　

１．５　ＡＬＶ．Ｊ前病毒ｃＤＮＡ提取　研磨肝组织　

群。其中最晚发现的禽白血病病毒Ｊ亚群（Ａｖｉａｎ　

ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　Ｊ，ＡＬＶ．Ｊ）对养鸡业危害最　

大。Ａ和Ｂ两个亚群在野外是常见的外源性病　

毒，可导致淋巴白血病。Ａ亚群被认为是商业产　

蛋鸡群中（来航鸡）的最为普遍感染的外源性病　

毒，其次是Ｂ亚群。Ｊ亚群禽白病病毒是２０世纪　

样，全血离心取血红细胞及收取病毒培养的细　

８０年代末Ｐａｙｎｅ等首先从肉用型鸡中分离鉴定　

出来的禽白血病病毒新的亚群，２０世纪９０年代　

全世界范围内暴发给肉鸡业造成了很大损失。　

ＧＰ８５是ＡＬＶ—Ｊ囊膜糖蛋白的主要成分，可诱导动　

物产生特异性抗体。ＡＬＶ．Ｊ　ｇｐ８５基因序列与其　

它的ＡＬＶ亚群比较只有４０％的同源性…。　

我国在１９９９年从市场上的商品代肉鸡中首　

次分离检测到ＡＬＶ一　］，且目前已有该病毒感染　

蛋鸡的报道，说明ＡＬＶ．Ｊ在国内的传播和危害在　

逐步蔓延。由于ＡＬＶ主要以垂直传播为主，对种　

群的控制极为重要，成功的净化和控制种群不被　

感染，可以大大降低禽白血病可能造成的经济损　

失［４－５］。为了进一步弄清肿瘤病的病因以及禽白　

血病在安徽省的流行情况，我们对省内部分种鸡　

鸡场和农贸市场鸡Ｊ亚群鸡白血病进行了调查，　

并从血清阳性鸡群中分离到一株禽白血病病毒Ｊ　

亚群　

１材料与方法　

１．１主要试剂和材料２×ＴＡＱ　ＰＣＲ　ＭＡＳＴＥＲ　

ＭＩＸ，ＭＡＲＫ　ＤＬ２０００购于天根生物工程公司；禽　

白血病病毒Ｊ亚群ｅｎｖ单克隆抗体ＪＥ９，ＳＰＦ鸡胚　

由江苏省动物预防医学重点实验室提供；Ｆｉｔｃ标　

记的兔抗鼠ＩｇＧ荧光二抗购于武汉博士德公司。　

１．２鸡群和血清２００８年１０月～２００９年６月，　

从安徽省内３个肉种鸡场和３个地市农贸市场商　

品鸡采集血样共４６０份。其中３６８份血清采自肉　

种鸡场，日龄为２２～４４周龄，其余９２份随机采自　

农贸市场商品鸡。泄殖腔样品３６８份均来自种　

鸡场。　

１．３禽白血病抗体检测试剂盒检测抗体所用　

样品为所采集的鸡血清，同时又采集相对应鸡的　

泄殖腔棉拭子进行禽白血病抗原检测。禽白血　

病Ｊ亚群抗体检测试剂盒（生产批号为０９２６８一　

胞，冻融３次后，使用常规的苯酚／氯仿法进行抽　

提，详细步骤参考分子克隆实验指南　。　

１．６　ＰＣＲ检测试验根据已发表的ＡＬＶ．Ｊ的原　

型株ＨＰＲＳ１０３基因序列（登录号：Ｚ４６３９０．１），在　

ｇｐ８５片段前后保守区内设计上下游引物。提取　

前病毒ｃＤＮＡ进行扩增。上游引物为５’一ｔｇｔｇｃｇ－　

ｔｇｇｔｔａｔｔａｔｔｔｃｃｇ－３’；下游引物为５　一ｔｇｇｔｇａｃｃｃｇｔａａｔｇｔｔｃｇ－　

３’，扩增目的产物为９５０　ｂｐ。引物由上海生工生　

物工程有限公司合成。　

ＰＣＲ反应体系：模板ＤＮＡ　５　ｔｘＬ，２×ＴＡＱ　ＰＣＲ　

ＭＡＳＴＥＲ　ＭＩＸ　１２．５　ｔｘＬ，上下游引物各１　Ｌ，双蒸　

水补至２５　Ｌ体系。反应条件：９５　ｏＣ预变性　

４　ｒａｉｎ；９５　ｏＣ变性４５　Ｓ，５７℃退火１　ｍｉｎ，７２℃延　

伸１　ｒａｉｎ，３２个循环；最后７２　ｃＣ延伸１０　ｒａｉｎ。ＰＣＲ　

产物１％琼脂糖电泳。　

１．７测序和序列分析上述ＰＣＲ产物送上海生　

工生物工程有限公司进行测序，应用ＤＮＡＳｔａｒ软　

件进行序列分析，测序结果与各参考毒株对比。　

１．８间接免疫荧光检测（ＩＦＡ）　首先制备鸡胚　

原代成纤维细胞用于病毒培养，传至第二代铺于　

９６孑Ｌ细胞培养板。将采集的泄殖腔样品经ＰＢＳ稀　

释后用孑Ｌ径０．２２　ｍ的滤器过滤，所得滤过液用于　

进行病毒分离培养。待细胞铺满７０％～８０％单层　

时，吸弃培养液，接种泄殖腔滤过液，同时设置ＰＢＳ　

接种的阴性对照组，３７　ｃＣ孵育１～２　ｈｏ然后再加含　

２％血清的细胞维持液，维持培养７　ｄ后，用ＰＢＳ将　

铺板的细胞清洗３次，每遍间隔５～１０　ｍｉｎ。再用　

７０％的丙酮溶液固定，一２０℃放置８～１０　ａｒｉｎ。将　

固定好的细胞取出，弃去丙酮，再次用ＰＢＳ清洗３　

遍，将ｅｎｕ单抗１：５０稀释后，放入湿盒，３７　ｃＩ＝孵育　

４５～６０　ａｒｉｎ。孵育完毕用ＰＢＳ清洗３次，再用Ｆｉｔｃ　

标记的荧光二抗１：５０稀释，３７　ｃｃ孵育４０～４５　ｒａｉｎ。　

孵育完毕用ＰＢＳ清洗３次，然后滴加磷酸甘油缓　

冲液保存，留用荧光显微镜观察。　

・

３４・　中国动物传染病学报　２０１０年５月　

，厶）　皇日木士甲　　

亚群抗体阳性检出率分别为１２％（１４／２５），　

２．２２％（１／４５）和９．１％（２／２２）（如表１）。３个鸡　

２．１　Ｊ亚群鸡白血病血清抗体检测结果　通过　

场的禽白血病ＡＢ亚群抗体阳性率分别为０（０／　

９２），１７．９３％（３３／１９４）和１．０８％（１／９２）（如表　

对３个种鸡场种鸡和３个地市农贸市场商品鸡的　

抗体进行检测，３个鸡场的禽白血病Ｊ亚群抗体　

阳性检出率分别为０（０／９２），７３．５％（１４７／１８４）　

和０％（０／９２）；３个农贸市场商品鸡禽白血病Ｊ　

２）。３个鸡场的禽白血病抗原阳性检出率分别为　

２．１７３％（２／９２），１７．９３％（３２／１９４）和１５．２２％　

（１４／９２）（如表３）。　

表１禽白血病Ｊ亚群抗体检测结果　

Ｔａｂｌｅ　１　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｂｏｄｙ　ｏｆ　Ａｖｉａｎ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　Ｊ　

２．２　临床症状鸡临床出现精神沉郁、羽毛蓬　

大，是正常的２～３倍，质脆易碎；在腿部、跗跖及　

脚部皮肤部位呈现突起状肿块，疑似血管瘤；病　

鸡的翅膀、胸肌、肾脏、脊柱内侧及颈部肌肉等部　

位呈现多形态的纤维肉瘤，呈灰白色，似鱼肉状　

外观（图１）。　

乱、虚弱和贫血，在腿部、脚部皮肤以及翅膀等部　

位出现肿块，破溃后血流不止，病鸡常因严重失　

血而死亡。对来自种鸡场２的疑似感染ＡＬＶ病　

死鸡进行解剖，病变主要表现为肝脏和脾脏肿　

第１８卷第３期　刘迪：安徽省禽白血病感染的血清学调查及ｇｐ８５基因的扩增　・　３５　・　

图１禽白血病疑似病例剖解　

Ｆｉｇ．１　Ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｕｓｐｅｃｔｅｄ　ｃａｓｅ　ｏｆ　Ａｖｉａｎ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　

Ａ：肝脏肿大，且表面弥散白色小结节；Ｂ：龙骨突内侧纤维内瘤，呈灰白色　

Ａ：Ｈｅｐａｔｏｍｅｇａｌｙ　ａｎｄ　ｎｏｄｕｌｅｓ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｌｉｖｅｒ；Ｂ：Ｈｏａｒｙ　ｆｉｂｒｏｉｄ　ｓａｒｃｏｍａ　ｏｎ　ｃａｒｉｎｉｆｏｎｎ　ｃａｒｔｉｌａｇｅ　

２．３　ＰＣＲ扩增结果经ＰＣＲ扩增，从病死鸡病　

Ｍ　１　２　３　４　５　６　７　８　

料组织，和病毒培养的细胞中扩增出９５０　ｂｐ特异　

性条带（图２），泳道６、７产物送上海生工测序，结　

果经比对为ＡＬＶ—Ｊ　ｇｐ８５特异性片段。　

２　０００　

２．４测序结果比对测序结果与英国原型毒株　

ｌ　０００　

９５０ｂｐ　

（ＨＰＲＳ１０３）及其他毒株比较，同源性在８９．１％～　

７５０　

５００　

９７．０％（表４）。　

２５０　

２．５　ＩＦＡ实验结果经泄殖腔滤过液接种的细　

１００　

胞，维持培养７　ｄ，荧光显微镜下可以看到细胞　

表面以及胞浆内有明显的绿色荧光。空白对照　

组细胞表面和胞浆内均未见绿色荧光，阳性对　

图２组织及病毒细胞培养ＰＣＲ检测结果　

Ｆｉｇ．２　ＰＣＲ　ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　ｃｅｌｌ　

照组绿色荧光明显。ＩＦＡ结果表明此细胞与　

１～５：５份不同病料的ＰＣＲ检测结果；６～７：病毒细胞的　

ＡＬＶ—Ｊ　ｅｎｖ单抗有显著的特异性反应，说明泄殖　

ＰＣＲ结果：８：细胞阴性对照　

腔样品中含有ＡＬＶ—Ｊ，可以感染细胞并在细胞内　

１—５：Ｆｉｖｅ　ｄｉｆｉｅｒｅｎｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓａｍｐｌｅｓ；６—７：Ｖｉｒｕｓ　ｉｎ　ｃｅｌｌ：　

增值　

８：Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　

表４安徽分离株与其他毒株的ｇｐ８５基因的同源・陛比对结果　

Ｔａｂｌｅ　４　Ｈｏｍｏｌｏｇｙ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｇｐ８５　ｇｅｎｅ　ｆｒｏｍ　ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ｖｉｒｕｓ　ｓｔｒａｉｎ　

Ａｈ０９０２　

ＨＰＲＳ１０３　

ＤＱ３１６９０６　

９７．０　

ｓｄ０００ｌ　

ＡＹ８９７２２３　

９４．２　

ｓｄ０００２　

ＡＹ８９７２２４　

９４．８　

ｓｄＯ１Ｏ１　

ＡＹ８９７２２５　

８９．１　

ｓｄ０２０１　

ＡＹ８９７２１８　

９５．４　

ｓｄ０３０１　

Ｙ８９７２２８　

９５．７　

ｓｄ９９０１　

ＡＹ８９７２２０　

９５．２　

・

３６・　中国动物传染病学报　２０１０年５月　

Ａ　Ｂ　

图３　间接免疫荧光检测结果　

Ｆｉｇ．３　Ｒｅｓｕｌｔ　ｏｆ　ｉｎｄｉｒｅｃｔ　ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ａｓｓａｙ（ＩＦＡ）　

Ａ：上毒细胞组；Ｂ：未上毒细胞组阴性对照　

Ａ：Ｉｎｏｃｕｌａｔｅ　ｖｉｒｕｓ；Ｂ：Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　

３　讨论　

检测出阳性的样本，其中１５％左右同时检测出　

ＡＢ亚群抗体，或抗原的阳性。根据这一推测，可　

３．１　ＥＬＩＳＡ对安徽省禽白血病Ｊ亚群的血清学　

能在鸡群内发生了ＡＢ亚群向Ｊ亚群的转化或者　

调查通过ＥＬＩＳＡ试剂盒检测ＡＬＶ—Ｊ的结果可　

多种亚群的白血病病毒混合感染　。又因为采　

以看出这３个种鸡场差别很明显。种鸡场１的阳　

样的时间是大于４０周龄，不处于排毒高峰期，可　

性率感染数为０，其次是种鸡场３的，阳性率最高　

能造成了抗原阳性检出率大大低于抗体阳性检　

的则是种鸡场２。种鸡场１的种鸡是本地的土　

出率的实验结果。　

鸡，而另外２家的则均是国外品种的杂交鸡。根　

种鸡场１与种鸡场３的情况稍微不同，在抗　

据此情况猜测国外品种的鸡被ＡＬＶ—Ｊ感染的可　

体阳性率几乎为０的情况下，抗原检测阳性率分　

能性要大大高于本地土鸡。　

别达到２．１７３％（１／９２）和ｌ５．２２％（１４／９２）。此　

根据种鸡场２的Ａ、］３亚群抗体和禽白血病　

结果表明鸡群内可能有免疫耐受的情况的出现。　

抗原ＥＬＩＳＡ检测的结果。结果比较发现：Ａ、Ｂ亚　

这种情况多数发生于垂直传播的病例，鸡胚就已　

群检测为阳性的样本，其中９０％以上都同时检测　

带毒或者雏鸡在一周龄就被感染。这种情况的　

出Ｊ亚群和禽白血病抗原的阳性结果。而Ｊ亚群　

带毒鸡不产生抗体但持续在泄殖腔排毒，不注意　

第１８卷第３期　刘迪：安徽省禽白血病感染的血清学调查及ｇｐ８５基因的扩增　‘３７・　

控制很容易造成禽白血病的大范围蔓延　引。这　

些情况提醒我们，在进行禽白血病种群净化的时　

候，要充分考虑到病毒可能的不同日龄不同途径　

感染鸡群的情况，便于制定全面合理的净化　

方案。　

由于不同亚群病毒在同一鸡群或同一鸡体　

系，以及可能发生的进一步演变趋势提供了参考　

依据　。　

参考文献　

［１］殷震，刘景华．动物病毒学［Ｍ］．２版．北京：科学　

出版社，１９９７：８７０—８８５．　

内传播，存在不同亚群发生基因重组的潜在威　

［２］Ｓａｍｂｒｏｏｋ　Ｊ，Ｆｒｉｔｓｃｈ　Ｆ，Ｍａｎｉａｔｉｓ　Ｔ．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　

［Ｍ］．２版．金冬雁，黎孟枫，译．北京：科学出版　

胁，在本试验检出的双重感染样本中是否发生基　

因重组现象尚待进一步研究　…。　

ＡＬＶ—Ｊ诱导髓细胞样肿瘤的情况在不同遗　

传品系的鸡群中是不一样的，肉用型的鸡群最　

为易感¨　。对周边的农贸市场出售的商品鸡抽　

样检测也能检测到一定数量的阳性样本，因此　

可以说明ＡＬＶ．Ｊ的流行是广泛的。国内已经有　

学者提出某些疫苗制造商使用不合格的非ＳＰＦ　

鸡胚制作的疫苗极有可能造成禽白血病的大范　

围流行。　

通过本次试验初步判定安徽省内不同地区　

有着不同程度的禽白血病流行情况，而且不同的　

品种都有感染，种鸡、蛋鸡、商品肉鸡都有检出。　

用ＣＥＦ成功的从泄殖腔采集样品中分离到一株　

禽白血病病毒，经ＩＦＡ、ＰＣＲ及ｇｐ８５基因序列分　

析结合ＥＬＩＳＡ实验结果鉴定该分离株属于Ｊ亚　

群禽白血病病毒。　

３．２　ＰＣＲ检测与测序结果比对禽白血病病　

毒囊膜糖蛋白ＧＰ８５组成囊膜表面突起上的球　

状结构，决定该病毒亚群的特异性。ＡＬＶ各亚　

群的ｇａｇ和ｐｏｌ基因序列高度保守，各亚群相互　

之间有９６％～９７％的同源性，但ｇｐ８５基因序列　

则有相当大的差异，Ａ—Ｅ亚群之间可以高达　

８５％的同源性，而Ｊ亚群与Ａ　Ｅ亚群之问只有　

４０％的同源性。因此本研究用ＰＣＲ方法扩增　

ｇｐ８５基因，并测序以此作为鉴定病毒及其亚群　

的重要依据。通过ＥＬＩＳＡ、ＩＦＡ、ＰＣＲ三种实验　

鉴定了此次分离的病毒为禽白血病病毒Ｊ亚群。　

序列比较发现，此分离株与其他毒株的ｇｐ８５同　

源性在８９％一９７％，与Ａ亚群的同源性只有　

９．２％～１　１．２％。　

以上结论表明此次分离到的病毒，与其他地　

方的分离毒株存在着一定突变性，也有着很高的　

同源性，与禽白血病病毒的特点相符合。为进一　

步研究病毒之间基因序列突变与病毒传播的关　

社，１９９６：４６４—４６７，４５—５５，１９－２２．　

［３］杜岩，崔治中，秦爱建，等．从市场商品肉鸡中检出　

Ｊ亚群禽白血病病毒［Ｊ］．中国家禽学报，１９９９，３　

（１）：１－４．　

［４］崔治中，张志，杜岩，等．我国肉用型鸡中Ｊ亚群禽　

白血病的流行现状调查［Ｊ］．中国兽医学报，２００２，　

２４（４）：２９２－２９４．　

［５］杜岩，崔治中，秦爱建，等．鸡的Ｊ亚群白血病病毒　

的分离及部分序列分析［Ｊ］．病毒学报，２０００，１６　

（４）：３４１－３４６．　

［６］秦爱建，崔治中，Ｌｅｅ　Ｌ，等．抗Ｊ亚群禽白血病病　

毒囊膜糖蛋白特异性单克隆抗体的研制及其特性　

［Ｊ］．畜牧兽医学报，２００１，３２（６）：５５６—５６２．　

［７］孙贝贝，崔治中，张青婵，等．ＡＬＶ—Ｊ人工感染鸡病　

毒血症和抗体反应动态［Ｊ］．中国农业科学，２００９，　

４２（１１）：４０６９—４０７６．　

［８］冯小宇，徐镔蕊，Ｌｕｃｋｙ　Ｆ　Ｌ等蛋鸡Ｊ亚群禽白血病　

病毒的分离结果与初步鉴定［Ｊ］．中国兽医杂志，　

２００８，４４（１）：４３—４４．　

［９］Ｍａｙｓ　Ｊ　Ｋ，Ｐａｎｄｉｒｉ　Ａ　Ｒ，Ｆａｄｌｙ　Ａ　Ｍ．Ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　

ｖａｒｉｏｕｓ　ｐａｒｅｎｔａｌｌｉｎｅｓ　ｏｆ　ｃｏｍｍｅｒｃｉａｌ　ｗｈｉｔｅ　ｌｅｇｈｏｒｎ　

ｌａｙｅｒｓ　ｔｏ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｗｉｔｈ　ａ　ｎａｔｕｒａｌｌｙ　ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　

ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ　ａｖｉａｎ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　

Ｂ　ｅｎｖｅｌｏｐｅ　ａｎｄ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　Ｊ　ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔ［Ｊ］．　

Ａｖｉａｎ　Ｄｉｓｅａｓｅ，２００６，５０（３）：３４２—３４７．　

［１０］岳筠，罗明星，史开志，等．贵州省禽白血病病毒Ｊ　

亚群感染的血清学检测与ＰＣＲ鉴定［Ｊ］．中国兽　

医科学，２００９，３９（０６）：５１６—５２１．　

［１　１］Ｐａｙｎｅ　Ｌ　Ｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｓ　ｉｎ　ａｖｉｎａ　ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｒｅｓｅａｒｃｈ　

［Ｊ］．Ｌｅｕｋｅｍｉａ，１９９２，６　Ｓｕｐｐｌ　３：１５０－１５２．　

［１２］Ａｒｓｈａｄ　Ｓ　Ｓ，Ｈｏｗｅｓ　Ｋ，Ｂａｒｒｏｎ　Ｇ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｔｉｓｓｕｅ　

ｔｒｏｐｉｓｍ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＨＰＲＳ２１０３　ｓｔｒａｉｎ　ｏｆ　Ｊ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　ａｖｉａｎ　

ｌｅｕｋｏｓｉｓ　ｖｉｒｕｓ　ａｎｄ　ｏｆ　ａ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ　ａｃｕｔｅｌｙ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ　

ｖｉｒｕｓ［Ｊ］．Ｖｅｔ　Ｐａｔｈｏｌ，１９９７，３４（２）：１２７—１３７．　

［１３］郭桂杰，孙淑红，崔治中．Ｊ亚群禽白血病病毒蛋　

鸡分离株ＳＤ０７ＬＫ１全基因组核苷酸序列的比较分　

析［Ｊ］．微生物学报，２００９，４９（３）：４００—４０４．