2023年12月7日发(作者：)

ＩＣＳＡ８０１３．３００：”．１００圆亘ＧＢ／Ｔ２７８２１—２０１１中华人民共和国国家标准化学口口口细菌ＤＮＡ损伤或修复试验方法Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ－－ＢａｃｔｅｒｉａｌＤＮＡｄａｍａｇｅｏｒｒｅｐａｉｒｔｅｓｔ２０１１－１２－３０发布２０１２－０８００１实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局学右中国国家标准化管理委员会厘１１１ＧＢ／Ｔ昌刖本标准主要起草人：刘清君、李朝林、林铮、史晓禧、吴维皑。本标准起草单位：中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所。２５１）提出并归口。本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（ＳＡＣ／ＴＣ——增加了范围一章（见第１章）。——介绍部分改为引言；本标准做了下列结构和编辑性修改：ｔｅｓｔｓ）（英文版）技术性内容一致。ｒｅｐａｉｒｏｒｄａｍａｇｅＤＮＡｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ－－Ｂａｃｔｅｒｉａｌｔｅｓｔｅｆｆｅｃｔ８７０．５５００：１９９８细菌ＤＮＡ（脱氧核糖核酸）损伤或修复试验（ＨｅａｌｔｈＳｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ＯＰＰＴｓ）的ＯＰＰＴＳＴｏｘｉｃａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＰｅｓｔｉｃｉｄｅｓｏｆＯｆｆｉｃｅ有毒物质办公室（ｔｈｅＡｇｅｎｃｙ，ＵＳＥＰＡ）预防、农药及ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｔａｔｅｓ本标准与美国环境保护局（Ｕｎｉｔｅｄ２００９给出的规则起草。１．１本标准按照ＧＢ／Ｔ２７８２１—２０１１标准分享网 免费下载本言引１２７８２１—２０１６Ｂ／ＴＳＵＡｃｔ（７ＲｏｄｅｎｔｉｃｉｄｅＩｎｓｅｃｔｉｃｉｄｅ，Ｆｕｎｇｉｃｉｄｅ剂和杀啮齿类动物剂法规（ｔｈｅＡｃｔ，１５Ｕ．Ｓ．Ｃ．２６０１）和联邦杀虫剂、杀真菌ＣｏｎｔｒｏｌＳｕｂｓｔａｎｃｅｓ依据有毒物质控制法规（ｔｈｅＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ＯＥＣＤ）出版的测试指南。ＣｏｏｐｅｒａｔｉｏｎＥｃｏｎｏｍｉｃｆｏｒ０ｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ与发展组织（ｔｈｅＰｒｏｇｒａｍｓ，ＯＰＰ）的测试指南和要求，以及世界经济合作ＰｅｓｔｉｃｉｄｅＮＴＩＳ）农药规划办公室（ｔｈｅＳｅｒｖｉｃｅ，ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎＴｅｃｈｎｉｃａｌＮａｔｉｏｎａｌＯＰＰＴ）制定的测试指南和要求，美国国家情报社出版的（ｔｈｅＴｏｘｉｅｓ，ＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎＰｏｌｌｕｔｉｏｎ４０），第一章的Ｒ部分的污染预防和有毒物质办公室（ｔｈｅＲｅｇｕｌａｔｉｏｎｓ，ＴｉｔｌｅＦｅｄｅｒａｌ而最终形成，这三个相关部门的测试指导分别是依据美国联邦法规（Ｃｏｄｅ农药和其他有毒物质安全性的系列测试指南之一。是ＯＰＰＴＳ整合了三个相关部门的测试指南和要求Ｓｕｂｓｔａｎｃｅｓ，ＯＰＰＴＳ）制定，用来评价ＴｏｘｉｃａｎｄＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，ＰｅｓｔｉｃｉｄｅｓｏｆＯＩｆｉｃｅ及有毒物质办公室（ｔｈｅＡｇｅｎｃｙ，ＵＳＥＰＡ）预防、农药ＰｒｏｔｅｃｔｉｏｎＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｔａｔｅｓ版）。该指南是美国环境保护局（Ｕｎｉｔｅｄ８７０．５５００：１９９８细菌ＤＮＡ（脱氧核糖核酸）损伤或修复试验（（英文ＯＰＰＴＳⅡ低不同测试程序引起的差异。ｓｅｑ．），为满足对测试数据的要求，ＵＳＥＰＡ把多套指南整合而形成一套最终的ＯＰＰＴＳ测试指南，以降．ｃ．１３６，ｅｔ标准参考了ＵＳＥＰＡ标准分享网 免费下载本标准规定了化学品细菌ＤＮＡ损伤或修复试验的试验原理、试验方法、试验步骤和试验数据及１２７８２１—２０１ＧＢ／Ｔ细菌ＤＮＡ损伤或修复试验方法化学品１范围验方法，而且都应记录在案。菌株保存液的准备和保存、生长条件、菌株的鉴定以及所需表型的验证等都应采用良好的微生物试３．２．２菌株的准备和保存Ｍ４５）。也可选择其他菌株。ｒＰｃ，Ｈ１７／ｓｕｂｔｉｌｉｓｐｏｌＡ，Ｗ３１１０／ｐ３４７８）和枯草杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓｃｏｌｉ宜选择大肠杆菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ３．２．１常用菌株３．２菌株选择ｂ）在液相基质上进行的测试（悬浮试验）。ａ）在固相基质上进行的测试（扩散试验）；可选用不同的方法进行测试，本方法宜选用以下两种方法３．１方法的选择３试验方法ｆｏｎａｔｅ）。ｍｅｔｈａｎｅｓｕｌ—本方法的参考物质包括但不限于氯霉素（ｃｈｌｏｒａｍｐｈｅｎｉｃ０１）和甲基磺酸甲酯（ｍｅｔｈｙｌ生长抑制或趋向于死亡。陷的一对菌株，由于ＤＮＡ修复缺陷菌株不能修复某一化学品引起的ＤＮＡ损伤，其表现为细胞趋向于品与ＤＮＡ的相互作用可以通过特异的细胞修复系统识别。本方法选择特异ＤＮＡ修复基因完好和缺本测试方法可用来检测化学品是否能够与细胞ＤＮＡ反应导致细胞生长抑制或致死亡作用。化学酶缺陷的菌株。变型菌株不同的致细胞死亡作用。修复功能缺陷的突变型菌株通常是一种或多种调控ＤＮＡ损伤修复陷菌株表现出的不同的生长抑制作用，测试化学品对修复功能健全的野生型菌株和修复功能缺陷的突通过检测受试物与遗传物质的相互作用检测其遗传毒性。通过检测修复功能健全的菌株和修复功能缺株试验中，修复缺陷菌株的细胞死亡和生长抑制表现不同。该试验本身并不是用来测量突变事件，商是细菌ＤＮＡ损伤或修复试验可用来测试ＤＮＡ损伤，在一套修复功能健全的菌株和修复功能缺陷菌２试验原理本标准适用于化学品细菌ＤＮＡ损伤或修复试验。报告。标准分享网 免费下载标准分享网 免费下载２培养皿扩散试验可采用两种方法４．１．１培养皿扩散试验４．１扩散试验４试验步骤培养皿或培养板中加入的受试物的量应完全一致。如有阳性反应，应用更窄浓度范围进行重复确认。具体情况逐步确定最高剂量。因为扩散试验的结果以获得的生长抑制作用带的直径或范围表示，所以溶解性来确定。受试物的细胞毒性结果受代谢活化系统的影响。对于溶解性高的无毒化学品，应根据最初试验应选择较宽的染毒浓度范围，染毒的上限浓度的选择应根据细胞毒性的结果和受试物的３．６．２染毒浓度受试物、阳性对照和阴性对照都应溶解在恰当的溶剂中，试验前用溶剂稀释备用。３．６．１溶剂３．６受试物可选择其他阳性对照参考物质。３．５．５其他阳性对照试验的阳性对照参考物质，包括代谢活化系统应根据试验选用的活化系统类型确定。３．５．４阳性对照用来保证代谢活化系统的有效性的基因型特异阳性对照。可选用甲基磺酸甲酯作为大肠杆菌试验的基因型特异阳性对照，选用丝裂霉素作为枯草杆菌试验３．５．３基因型特异对照阴性对照应不表现出明显的生长抑制作用（即对两种菌株的影响是相同的）。常选氯霉素。３．５．２阴性对照每一次试验都应设置阳性对照、阴性对照和溶剂对照。３．５．１平行对照３．５对照组齿类动物的肝匀浆微粒体酶系。也可选用其他种属、组织或方法。应设置加与不加代谢活化系统的平行对照组。常用的代谢活化系统是经酶诱导剂（物）处理过的啮３．４代谢活化满足实验设计的要求。应选用良好的微生物方法，使用新鲜的细菌培养物培养细菌。记录细胞所处的生长期和细胞密度，３．３菌株的培养２７８２１—２０１１ＧＢ／Ｔ标准分享网 免费下载３外，还应说明受试物是否出现快速，弥散及双向的生长抑制带。如果出现了双向生长抑制带，应说明对对于扩散试验，应说明培养皿或培养板的直径，测量结果应说明是否减去了培养皿或培养板的直径。此所有的试验中，浓度应以试验处理时的最终浓度表示，并提供原始数据，包括实际测试数，如净值。５．１．３原始数据出最小抑制浓度；根据半固体培养基上的受试物稀释浓度得出最小致死浓度。５．１．２．３结果还可表示为最小抑制浓度或最小致死浓度。根据液体培养基中是否出现可见的生长得浓度应以单位体积的量表示，即摩尔浓度。５．１．２．２结果也可表示为一定存活率的浓度（如Ｄ。，表示３７％存活的浓度）。该数据来源于存活曲线。种菌株的相对存活比例。以剂量一反应形式给出菌株的存活数据，宜给出每一菌株存活百分数或存活比例，或者给出两５．１．２．１５．１．２液体悬浮试验数据，应使用相同的单位。应以生长抑制带的直径（以ｍｍ计）或生长抑制带的范围（以ｍｍ２计）表示结果，如果有剂量一反应５．１．１扩散试验５．１结果处理５试验数据和报告ｈ。ｈ～２４试验的所有培养皿都应采用相同的培养条件，通常为３７℃，１８４．４培养条件少应使用两个独立的样本确定存活细胞的数量。如选用培养皿扩散试验，每一稀释度至少应在两个单独的培养皿进行试验。对于液体悬浮试验，至４．３培养的数量的改变判断不同的抑制作用，得出阳性结果。４．２．３可使用单一剂量的受试物处理成对的细菌悬液（通常最初是浑浊的），通过比较浑浊度增加速率过观察培养后是否出现可见的生长现象来验证。４．２．２对于澄清的细菌悬液，可用一系列的受试物稀释液染毒，得出每一菌株最低的抑制浓度，并可通还是依赖于浓度。用受试物对细菌悬液进行染毒，根据细菌存活量（克隆形成数）判断受试物的作用是依赖于时间４．２．１４．２悬浮试验琼脂的培养板中。在培养板扩散试验中，既可把细菌加在琼脂中铺板也可把细菌涂在琼脂表面，把受试物溶液加在含４．１．２培养板扩散试验置于琼脂表面，与细菌接触。ｂ）ＤＮＡ修复功能健全的菌株和修复功能缺陷菌株划在同一琼脂表面，把含有受试物的培养皿ａ）琼脂中加入单一菌株进行铺板或把菌株涂在琼脂表面，受试物加在琼脂表面的滤纸上；２７８２１—２０１１ＧＢ／ＴＧＢ／Ｔ２７８２１－－２０１１内带和外带是否都进行了测量。５．１．４活性计数以某一稀释度下培养皿真正的计数和涂板的体积或原始滴度（细胞数每毫升）表示。不应仅提供最终的结果（如比率、差异、存活比），而不提供原始试验数据。５．２统计评价应选用恰当的统计方法进行评价。５．３结果的判断５．３．１阳性结果的判断有多个标准。其一为修复缺陷菌株出现具有统计学意义的剂量相关的抑制趋势或死亡差异。另一标准为至少在一个测试点，出现可重复的、具有统计学意义的阳性反应。５．３．２如果某一受试物在修复缺陷菌株上未见具有统计学意义的剂量相关的抑制趋势或死亡差异，在所有的测试点，也没表现出可重复的、具有统计学意义的阳性反应，即可认为该受试物与所用试验系统中的遗传物质没有相互作用。５．３．３在评价时应同时考虑生物学上的显著性和统计学上的显著性。５．４测试评价细菌的ＤＮＡ损伤或修复试验既不是用来测量ＤＮＡ损伤本身，也不是用来测量突变。该试验是检测ＤＮＡ损伤表现出的细胞死亡或生长抑制。如果在某一试验系统中，受试物的ＤＮＡ损伤试验的结果为阳性，但在另一个试验系统中为阴性，如果没有更好的试验数据，其结果很难判断。５．５测试报告试验报告应包含以下信息：——所用细菌的种属；——试验菌株的生长期；——培养基的组分；——所用制备代谢活化系统和试验所用其他方法的详细资料；——处理方法，包括使用剂量和剂量选择的原理、阳性对照和阴性对照的选择原理——细胞死亡程度的判定方法；——剂量一反应关系（如果能够提供）。４ＧＢ／Ｔ２７８２１—２０１１参考文献Ｅ１］Ａｍｅｓ，Ｂ．Ｎ．ｅｔａ１．ＭｅｔｈｏｄｓｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｎｇｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓａｎｄｍｕｔａｇｅｎｓｗｉｔｈｔｈｅＳａＬｍｏｎｅｌｌａ／ｍａｍｍａｌｉａｎ－ｍｉｃｒｏｓｏｍｅｍｕｔａｇｅｎｉｃｉｔｙｔｅｓｔ．ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ．１９７５，３１：３４７—３６４Ｅ２］Ｋａｄａ，Ｔ．ｅｔＥｓ］Ｌｅｉｆｅｒ，ｚ．ｅｔＥ４３９７０—９７３ａ１．Ｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｈｏｓｔ－ｍｅｄｉａｔｅｄｒｅｃ－ａｓｓａｙｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓｆｏｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｃｈｅｍｉｃａｌｍｕｔａ。ｇｅｎｓ；ａｎｄｐｈｌｏｘｉｎｅ，ａｍｕｔａｇｅｎｉｃｒｅｄｄｙｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ．１９７２，１６：１６５—１７４ａ１．ＡｎｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｂａｃｔｅｒｉａｌＤＮＡｒｅｐａｉｒｔｅｓｔｓｆｏｒｐｒｅｄｉｃｔｉｎｇｇｅｎｏｔｏｘｉｃｉｔｙａｎｄｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｉｃｉｔｙ：ＡｒｅｐｏｒｔｏｆｔｈｅＵ．Ｓ．ＥＰＡ’ｓＧｅｎｅ－ＴｏｘＰｒｏｇｒａｍ．ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ．１９８１，８７：２１１—２９７Ｓｌａｔｅｒ，Ｅ．Ｅ．ｅｔａ１．Ｒａｐｉｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｍｕｔａｇｅｎｓａｎｄｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｓ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ．１９７１，３１：５