2023年12月29日发(作者：)

第59卷

第3期2023年06月

)JOURNALOFQINGDAOUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES青岛大学学报(医学版)Vol.59,No.3June 2023大鼠牙髓组织AIM2炎症体表达及其与炎症反应关系王继玲1,吴广升2,王亚飞2(中国人民解放军海军青岛特勤疗养中心,山东青岛 266071 1

疾病预防控制科; 2

口腔科)中的表达变化。方法

通过开髓法建立大鼠牙髓炎症模型,采用免疫荧光染色检测AIM2炎症体在牙髓组织中的表达分布;利用实时定量P检测大鼠牙髓组织中A伊CR(RT-PCR)IM2炎症体基因表达量的变化。结果

苏木精-红(染色显示单纯的开髓可诱发大鼠牙髓炎症反应,开髓3d后出现炎性反应并在7d后出现牙髓坏死。免疫HE)荧光染色显示,大鼠牙髓组织中有A开髓5d后牙髓细胞层出现明显阳性表达。RIM2炎症体表达,T-PCR结果显),)。结论 A并P<0.05IL-1F=164.414,P<0.05IM2炎症体存在于大鼠牙髓组织中,β在开髓5d后显著上调(且其表达量与牙髓炎症反应呈正相关。[关键词]黑色素瘤缺乏因子2;炎性小体;大鼠,

牙髓炎;Sraue-Dawlepgy:/doi10.11712ms.2096-5532.2023.59.078j,示,开髓术后3dA下游cIM2基因表达显著增加(F=1178.910,P<0.01)asase-1基因表达上调(F=81.224,p[()摘要]炎症体在大鼠牙髓组织中的分布及其在牙髓炎症发生、发展

目的

探讨黑色素瘤缺乏因子2AIM2[()中图分类号]文献标志码]文章编号] R781.31

[ A

[ 203-0407-05[://///;2网络出版] 023-07-26 14:05:47p[]开放科学(资源服务)标识码(OSID)EXPRESSIONOFABSENTINMELANOMA2INFLAMMATORYBODYINRATDENTALPULPANDITSASSOCIATIONWITH,INFLAMMATORYRESPONSE

WANGJilinuanshenaei

(DiseasePreventionandControlSectiong,WUGgg,WANGYf,Q)QindaoSecialServiceSanatoriumofthePLANavindao266071,Chinagpyg[])ABSTRACT

Obective Toinvestiatethedistributionofabsentinmelanoma2(AIM2inflammatorodinratdentalgybyjulissueandthechaneinitsexressioninthedevelomentandproressionofpulitis.

Methods Oeninfpulhamberpptgppgppgopc,sionanddistributionofAIM2inflammatorodindentalultissueandRT-PCRwasusedtomeasurethechaneinthemfluorescentstaininasusedtomeasuretheexres-ppgwpexressionlevelofAIM2inflammatorodinratdentalulissue.

Results HEstaininhowedthatoeninfpufluorescentstaininhowedtheexressionofAIM2in-ppny7apopggsp;beralonecouldinduceinflammatoresonseofratdentalpulinflammatoresonsewasobservedondafterpuleninyrppyrpy3apopg,flammatorodinratdenta-PCRybyppppcyy5apopg,showedthatondafteruleninthereweresinificantincreasesintheexressionlevelsoftheAIM2gene(F=1178.910,y3appopggp),ninF=164.414,P<0.05.

Conclusion AIM2inflammatorodxistsinratdentalpulissueandthechaninrendofg(ybyeptggt[];;,KEYWORDS

pulitisabsentinmelanoma2;inflammasomeratsSraue-Dawleppgy)),P<0.01anddownstreamcasase-1(F=81.224,P<0.05andtherewasasinificantincreaseinIL-1ndafterpule-gy5apoppβrp因其能引起较为剧烈

牙髓炎是口腔常见疾病,的疼痛易对工作、学习和生活等方面产生较大的影响,但其发病机制尚不完全清楚。近1因为0余年,炎症体的发现,人们对牙髓炎的发生、发展及转归有了全新的认识。已有研究结果表明,在脂多糖等因]1-2(),炎症体的表达增加[并随着炎症的进展AIM2其表达量有一定的升高。然而,目前对AIM2炎症体在牙髓组织中尤其是体内研究还相对较少。本文通过构建大鼠牙髓炎模型,研究AIM2炎症体在大髓炎拮抗剂或治疗分子靶点提供理论依据。现将结果报告如下。1

材料与方法1.1

实验材料低温离心机(Centrifue5804R,Eendorf公gpp鼠牙髓炎症发生、发展中的作用机制,为后期寻找牙素刺激下,牙髓成纤维细胞中黑色素瘤缺乏因子2[收稿日期]2修订日期]2022-12-12;

[023-05-23[)基金项目]山东省自然科学基金面上项目(ZR2022MH062[),第一作者]王继玲(女,副主任护师。1965-[),:通信作者]王亚飞(男,博士,主治医师。E1987-mailwf-y19870804@。;,司,德国)PCR仪(MasterclergradientEen-ypp;德国)超低温冰箱(三洋dorf公司,EKY0014595,;公司,日本)Nanodro000分光光度计(Thermop2Copyright©博看网. All Rights Reserved.

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版)59卷;美国)荧光定量PScientific公司,CR仪(ABI7500,;赛默飞公司,美国)ODYSSEY双色红外线激光成;(像系统(美国)LI-COR公司,TrizolInvitroen公g;;司,美国)八联管(美国)牙科高Invitroen公司,g;/速涡轮机手机(日本)松风公NSK公司,12球钻(。美国)Cruz公司,1.2

实验方法(;上海士锋生物科技有限公司)Anti-AIM2(Santa-;司,日本)氯仿、异丙醇、无水乙醇、RNA酶灭活水,;英国A200,bcam)37℃孵育30minPBS洗3次,;每次5m加入D细胞核染色)室温下孵育inIPA(;;每次5m体积分数0.3minPBS洗3次,in10缓冲甘油封片,4℃避光保存。荧光显微镜下观察切片(。观察期间应处于避光环境中)),每Santa-Cruz4℃湿盒中孵育过夜;PBS洗3次,;次5m在避光条件下,加FinITC标记的二抗(1∶/1.2.4 RT-PCR检测 100gL水合氯醛腹腔注射麻醉后,活体进行大鼠上颌磨牙取材,将磨牙小心剥离,去净周围软组织后置于液氮罐中保存。进行将牙齿去除,用手术刀片小心刮净mRNA提取时,牙齿周围组织,放入液氮中5min后置于匀浆器中研磨。冰箱保存备用。应用037A反转录试剂PCR扩增试剂盒完成扩增。PCR的反应条件为:,,共495℃下变性30s95℃下5s0个循环;60℃。以内参照蛋白G下离解30~34sAPDH基因水平为默认值1。PCR引物种类及其序列见表1。盒将RNA逆转录为cDNA。以cDNA为模板利用采用T置于-8RIzol法提取细胞总RNA,0℃1.2.1

大鼠牙髓炎症模型的建立

所用实验动物为8周龄雄性S购于空军军医大学动D大鼠20只,/物中心。1仰卧00gL水合氯醛腹腔注射麻醉后,固定于鼠板上,用金属镊子撑开大鼠下颌,暴露上颌/磨牙,用高速涡轮机(不喷水,在大鼠上颌12球钻)磨牙停止磨切,用金属探针在透红点加压,形成穿髓孔。每只大鼠右侧上颌磨牙为开髓牙,左侧为对照牙。每3只同样处理的大鼠为1组。开髓组仅依靠物理刺激形成牙髓炎症反应。根据苏木精伊红(染-HE)色后炎症程度,即组织切片中浸润的炎性细胞的程、度不同分为正常组、少量炎性细胞浸润)3d组(5d。大部分牙髓组织坏死)10d组(/1.2.2 HE染色

大鼠给予100gL水合氯醛腹腔/注射,待完全麻醉后,开胸;用40gL多聚甲醛行心脏灌注,待全身僵硬后,解剖大鼠上颌,取出上颌双/侧磨牙及部分上颌骨。将标本置于40gL多聚甲醛中固定1二甲苯透明,石蜡2h。常规乙醇脱水,髓炎症状态。包埋制作切片,进行HE常规染色,观察动物模型牙1.2.3

免疫荧光染色

组织固定包埋制成石蜡切/片,常规脱蜡水化后,以PBS(H值7.4,0.01molp;胰蛋白酶行抗原修复37℃下孵育30minPBS洗3、组(大量炎性细胞浸润)牙髓组织坏死)和7d组(面开髓,开髓深度约为1mm,待有透红点时1.3

统计学分析采用GrahPadPrism5.0软件进行统计学分p析。所得计量资料数据以x两组比s形式表示,