基于基因表达芯片和连接网络技术筛选干预缺氧诱导视网膜血管内皮细胞

2023年12月7日发(作者：)

中华眼底病杂志２０１６年１１月第３２卷第６期ＣｈｉｎＪＯｅｕｌＦｕｎｄｕｓＤｉｓ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１６，Ｖ０１．３２，Ｎｏ．６５９１・眼底疾病基因、干细胞研究・基于基因表达芯片和连接网络技术筛选干预缺氧诱导视网膜血管内皮细胞模型的小分子化合物研究聂川张亮王俊平王越张春一罗先琼５１１４４２广州，广东省妇幼保健院新生儿科通信作者：罗先琼，Ｅｍａｉｌ：ｌｕｏｘｑｇｚ＠１２６．ｃｏｒｎＤＯＩ：１０．３７６０／ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００５—１０１５．２０１６．０６．００７【摘要】目的利用基因表达芯片技术和连接网络（ＣＭＡＰ）技术筛选干预缺氧诱导视网膜血管内皮细胞模型的小分子化合物和药物。方法将前期研究获取的ＣｏＣｌｚ诱导的缺氧人胚视网膜微血管内皮细胞模型中包括上调和下调的３２６个差异表达基因建立成查询签名格式文件，进入ＣＭＡＰ。通过疾病特征性差异基因谱与ＣＭＡＰ中的对照基因表达谱之间的逐一比对，获取正相关和负相关的小分子化合物和药物。进一步检索文献，了解其作用机制，对照早产儿视网膜病变（ＲＯＰ）的发病机制，筛选与ＲＯＰ正相关或负相关的化合物。结果差异表达基因ＣＭＡＰ检索发现，４４种小分子化合物和药物与ＲＯＰ存在正相关；１８种小分子化合物和药物与ＲＯＰ存在负相关。文献检索发现，环吡酮胺、ＣｏＣＩｚ、棉酚和醉茄素Ａ与ＲＯＰ有正相关；环腺苷酸、去甲骆驼蓬碱、柚皮甙和丙磺舒与ＲＯＰ有负相关。结论环吡酮胺、ＣｏＣＩ：、棉酚和醉茄素Ａ与ＲＯＰ有正相关；环腺苷酸、去甲骆驼蓬碱、柚皮甙和丙磺舒与ＲＯＰ有负相关。【关键词】早产儿视网膜病／预防和控制；基金项目：国家自然科学基金（７１１７３０５５）中图分类号：Ｒ７７４．１Ｒ３９４．３基因表达；预测；计算生物学ＳｃｒｅｅｎｏｆｃｏｍｐｏｕｎｄｓＺｈａｎｇａｆｆｅｃｔｉｎｇｔｈｅｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｅｄ－ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｔｉｎａｌｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓＮｉｅＣｈｕａｎ，Ｌｉａｎｇ，ＷａｎｇＪｕｎｐｉｎｇ，ＷａｎｇＹｕｅ，ＺｈａｎｇＣｈｕｎｙｉ，ＬｕｏＸｉａｎｑｉｏｎｇＮｅｏｎａｔｅＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＭａｔｅｒｎａｌａｎｄＣｈｉｌｄＨｅａｌｔｈＨｏｓｐｉｔａｌ，ＧｕａｎｇｚｈｏｕＣｏｒｒｇｓｐｏｔｚｄｉ挖ｇａｕｔｈｏｒ：ＬｕｏＸｉａｎｑｉｏｎｇ，Ｅｍａｉｌ：ｌｕｏｘｑｇｚ＠１２６．ｃｏｍ５１１４４２，Ｃｈｉｎａ［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＭｅｔｈｏｄｓＴｏｓｃｒｅｅｎｏｎｃｏｍｐｏｕｎｄｓｇｅｎｅｏｒｄｒｕｇｓｃａｎａｆｆｅｃｔｔｈｅｈｙｐｏｘｉａｉｎｄｕｃｅｄ—ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｒｅｔｉｎａｌｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｂａｓｅｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｍｉｃｒｏａｒｒａｙｓａｎｄｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙｍａｐ（ＣＭＡＰ）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．Ｔｏｔａｌｌｙ３２６ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅｄａｎｄｄｏｗｎ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄｇｅｎｅｓｏｆｈｙｐｏｘｉｃｈｕｍａｎｅｍｂｒｙｏｎｉｃｒｅｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓｍｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｏｂａｌｔｃｈｌｏｒｉｄｅｉｎｔｈｅｐｒｅｖｉｏｕｓｓｔｕｄｙｗｅｒｅｃｏｎｖｅｒｔｅｄｉｎｔｏｑｕｅｒｙｓｉｇｎａｔｕｒｅｆｏｒｍａｔｄｏｃｕｍｅｎｔｓ．ＧｅｎｅｐｒｏｆｉｌｅｏｆｔｈｅｄｉｓｅａｓｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｗａｓｔｈｅｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈａｔｏｆｃｏｎｔｒｏｌｉｎＣＭＡＰｗｅｂｓｉｔｅｄａｔａｂａｓｅ，ｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｒｅｌａｔｅｄｏｕｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ４４ｔｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ（ＲＯＰ）ｗｅｒｅｆｉｎａｌｌｙｓｃｒｅｅｎｅｄａｎｄ１８ｃｏｍｐｏｕｎｄｓｏｒｄｒｕｇｓｈａｖｅｐｏｓｉｔｉｖｅａｎｄｎｅｇａｔｉｖｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈＲＯＰｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｇｏｓｓｙｐｏｌａｎｄｓｅａｒｃｈｉｎｇＣＭＡＰｄａｔａｂａｓｅｗｉｔｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｇｅｎｅｓ．Ｃｉｃｌｏｐｉｒｏｘ，ｃｏｂａｌｔｅｆｆｅｃｔＲＯＰ．ＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓｗｉｔｈａｆｅｒｉｎＡｈａｖｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｗｉｔｈＲＯＰ．Ｃｙｃｌｉｃａｄｅｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｈａｒｍａｌｏｌ，ｎａｒｉｎｇｉｎａｎｄｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄｈａｖｅｈａｖｅｈａｖｅａａａｎｅｇａｔｉｖｅｏｎｏｎＣｉｃｌｏｐｉｒｏｘ，ｃｏｂａｌｔｃｈｌｏｒｉｄｅ，ｇｏｓｓｙｐｏｌａｎｄｗｉｔｈａｆｅｒｉｎＡｐｏｓｉｔｉｖｅｎｅｇａｔｉｖｅｅｆｆｅｃｔｅｆｆｅｃｔ．ＲＯＰ．Ｈｏｗｅｖｅｒ，ｃｙｃｌｉｃａｄｅｎｏｓｉｎｅｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ，ｈａｒｍａｌｏｌ，ｎａｒｉｎｇｉｎａｎｄｐｒｏｂｅｎｅｃｉｄ［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ／ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ＆ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；Ｆｏｒｅｃａｓｔｉｎｇ；ＣｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌｂｉｏｌｏｇｙＦｕｎｄｐｒｏｇｒａｍ：ＮａｔｉｏｎａｌＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅＦｏｕｎｄａｔｉｏｎｏｆＣｈｉｎａ（７１１７３０５５）早产儿视网膜病变（ＲＯＰ）的发病初期病理基础是视网膜血管生成抑制，缺血、缺氧可抑制视网膜血管生成并成为ＲＯＰ发病的主要病因之一［１］。目前ＲＯＰ的治疗主要集中在氧浓度控制、抗氧化治疗、环氧化酶抑制剂、普萘洛尔、血管生成抑制因子等方面，但多数药物疗效存在争议且无明确结论‘２。。近年随着分子生物学技术的发展，已经可以利用基因芯片技术对疾病的基因谱表达进行分析。Ｌａｍｂ等‘３３在２００６年建立了万方数据中华眼底病杂志２０１６年１１月第３２卷第６期ＣｈｉｎＪＯｅｕｌＦｕｎｄｕｓＤｉｓ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１６，Ｖ０１．３２，Ｎｏ．６在体外培养并采用小生物活性分子处理后的人体细胞基因表达谱的查询数据库，也被称为连接网络（ＣＭＡＰ），目前已收录超过７０００个基因表达谱以及与其相关的１３０９种小分子化合物和药物。该数据库可通过基因表达谱的改变探索化合物的分子效果是与基因表达的作用相似或相反而用于药物的研发，已广泛应用到肿瘤靶向基因小分子替代物筛选、基于临床数据和网络模块化的新药物适应证预测、精确医学药物研发、利用基因表达谱聚类分析阐明天然药物药理机制等方面的研究［。…。但目前利用此数据库进行眼科疾病与小分子物质之间关系的研究尚少。本研究旨在利用基因表达芯片技术和ＣＭＡＰ技术预测可能对Ｒ（）Ｐ有干预效果的小分子化合物，为ＲＯＰ干预药物的研制提供相关理论基础。现将结果报道如下。１材料和方法将３２６个差异表达基因建立成查询签名格式文件，进入ＣＭＡＰ网站（ｈｔｔｐ：／／ＷＷＷ．ｂｒｏａｄ．ｍｉｔ．ｅｄｕ／ｃｍａｐ／）。通过疾病特征性差异基因谱与ＣＭＡＰ中的对照基因表达谱之间的逐一比对．得到正相关和负相关的小分子化合物或药物和药物。将结果按ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙｓｃｏｒｅ强度进行排序，正相关取＞０．７，负相关取＜一０．７，筛选出正负相关的小分子化合物和药物。数据库白行计算出Ｐ值，值越小代表富集越显著。得分：由ｐｅｒｔｕｒｂａｇｅｎ中所有实例的关联系数综合计算出的富集关联系数，范围一ｌ～＋１。获得负分数的小分子化合物和药物表示与某一特殊的生物过程或状态有相反或拮抗的联系；获得正分数的小分子化合物和药物则表示与这些小分子化合物和药物有类似的作用机制。得分＞Ｏ．７可能与ＲＯＰ正相关；得分＜一０．７可能与ＲＯＰ负相关。特异性：评估ｐｅｒｂｕｒｂａｇｅｎ和差异基因集（ｓｉｇｎａｔｕｒｅｏｆｉｎｔｅｒｅｓｔ）之间关联系数唯体外培养的人胚视网膜血管内皮细胞采用ＣｏＣｌ。处理，建立视网膜血管内皮细胞缺氧模型，模拟ＲＯＰ病理改变。双色微阵列法分析差异基因表达，微阵列显著分析（ＳＡＭ）软件筛选差异表达基因，荧光定量逆转录聚合酶链反应，基因分类法进行基因功能富集分析。Ｆｅａｔｕｒｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ软件获取并分析数据，得出基因差异倍数，按差异倍数上调≥２．０倍，差异倍数下调４０．５进行聚类。结果筛查出３２６个差异表达基因，其中上调基因１９８个，下调基因１２８个（图１）旧Ｊ。本研究利用已发现的３２６个差异表达基因，进行后续ＣＭＡＰ研究。一性值，值越小越好，值越大说明被研究的小分子化合物和药物有多种生物效应。将筛选出的小分子化合物和药物进行文献检索，检索数据库为美国国立医学图书馆ＰｕｂＭｅｄ、中国期刊全文数据库。搜寻相关文献，对照Ｒ（）Ｐ发病机制，了解其在抗氧化治疗、环氧化酶抑制剂、血管生成抑制等方面作用机制，确定与ＲＯＰ正相关或负相关的化合物。２结果差异表达基因ＣＭＡＰ检索发现，４４种小分子化合物和药物与之存在正相关（表１）；１８种小分子化合琶ｏ三≈三暑物与之存在负相关（表２）。文献检索发现，４４种存在正相关的小分子化合物和药物中，环吡酮胺、ＣｏＣｌｌ、棉酚和醉茄素Ａ等４种化合物和药物可能与Ｒ（）Ｐ存在正相关；１８种存在负相关的小分子化合物中，环腺苷酸、去甲骆驼蓬碱、柚皮甙和丙磺舒等４种化合物可能与Ｒ（）Ｐ存在负相关。３讨论Ｒ（）Ｐ的发病机制通路主要包望：望三望：望：～．Ｌ∽＼．∽＼卜．寸∽＼．Ｌ．∽望善；＿言＿言呼言＿言Ｉ言荔ｉ罱ｉ葛ｉ器ｉ器ｉｉ；；；。ｒ－ｑ磊罱葛］拐＠图１人胚视嘲膜血管内皮细胞基因表达染色交换热图。ｌＡ．配时的人胚视刚膜血管内皮细胞（对照组）样本监督聚类分析，显示有１５４００个基因信号强度大于８００；１Ｂ．与对照组比较．视网膜血管内皮细胞缺氧模型可见３２６个差异表达基因，其中上调基因１９８个，下调基因１２８个。红色表示上调基因，绿色表示下调基因括缺氧、氧化应激、炎症以及生后发育迟缓，其中低氧、氧化应激和炎症往往相互作用，影响血管生长从而导致ＲＯＰＥ”１３］。另有研究发万方数据中华眼底病杂志２０１６年１１月第３２卷第６期ＣｈｉｎＪＯｃｕｌＦｕｎｄｕｓＤｉｓ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１６，Ｖ０１．３２，Ｎｏ．６５９３现高碳酸血症、酸中毒、系统感染也参与ＲＯＰ的发病ｕ４｜。由于ＲＯＰ的人体视网膜标本难以获取，而鼠类动物模型的基因和人类不完全相同，因此通过缺氧诱导的ＲＯＰ动物模型而获取的基因表达谱改变不能完全反映人类ＲＯＰ基因改变。石文静等ｕ副发现与正常小鼠相比，缺氧诱导的视网膜病变动物模型小鼠有表１排序１２３４５６７８９１３４７个差异基因表达，并呈现出１２类不同表达差异变化模式。Ｔｅａ等［１６３发现ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙ新生大鼠视网膜疾病模型中，差异基因表达２５１个。ＣｏＣｌｚ是一种常用的化学性低氧模拟剂，能诱导多种细胞产生缺氧性损伤，导致细胞存活率降低和细胞凋亡。我们前期研究采用ＣｏＣｌ。诱导视网膜血管内皮细胞缺氧，ＣＭＡＰ筛选出与ＲＯＰ正相关的小分子化合物和药物得分０．９９８０．９８２０．９７７０．９４９０．９４１０．９３８０．９３３０．９３３０．９３０小分子化合物和药物Ｐ值环吡酮胺（ｃｉｃｌｏｐｉｒｏｘ）０．０００００相关性０．０００００．０００００．０００００．１２８７功能抗真菌药表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）抑制剂组蛋白去乙酰化酶抑制剂抗高血压药诱导细胞缺氧钙调素结合蛋白抑制剂男用避孕药紫铆因（ｂｕｔｅｉｎ）０．０００Ｓｃｒｉｐｔａｉｄ６２０．００００４００苯氧苄胺（ｐｈｅｎｏｘｙｂｅｎｚａｍｉｎｅ）０．０００卡米达佐（ｃａｌｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ）０．００７ＳＴＯＣＫｌＮ一３５２１５ＣＯＣｌ２（ｃｏｂａｌｔｃｈｌｏｒｉｄｅ）０．０００２６５５０．０００００．０７３０．００００．０００７０００．０００５０００４８棉酚（Ｇｏｓｓｙｐ０１）０．０００Ｎ一（｛５一ｒ（１Ｅ）一Ｎ—ｃａｒｂａｍｏｙｌｅｔｈａｎｅｈｙｄｒａｚｏｎｏｙｌ］一０．００９３一ｔｈｉｅｎｙｌ）ｍｅｔｈｙｌ）一２一ｅｈｌｏｒｏａｃｅｔａｍｉｄｅ０．０９８０１０ｌｌ１２１３１４洛莫司汀（１０ｍｕｓｔｉｎｅ）０．０００醉茄素Ａ（ｗｉｔｈａｆｅｒｉｎ０１７３５７０—０００００６０．９ｉ００．８８００．８６４０．８６４０．８６２０．０３５３抗肿瘤药可以缓解肌肉萎缩，可以抑制血管和肿瘤生长抗生素类药Ａ）０．０００２８６５０。０７９００．０６２０．０１１０．３０７５４３利福布汀（ｒｉｆａｂｕｔｉｎ）０．００４Ｎ—ｌ４一（３一ＯＸＯ～３一ｐｈｅｎｙｌｐｒｏｒｐｈｅｎｙｌｌ一２．２一ｄｉｐｈｅｎｙｌａｅｅｔａｍｉｄｅ０．００００２１一ｅｎ一１一ｙ１）０．０３８８７１５１６１７１８１９２０２１２２２３２４２５依他尼酸（ｅｔａｃｒｙｎｉｃａｃｉｄ）０．００６０９５１５５８７７０．０００７２８４０．８５３Ｏ．８５００．８４６０．８４５０．８４３０．８３８０．８２６０．８１８０．８１１０．７９８０．７８９０．０２０７０．０１８０．０６７０．２０４０．０２６０．０９６０．０４１８８４３４５利尿药免疫抑制剂，抗增生，抗肿瘤药止血药抗病毒药抗肿瘤药司莫司汀（ｓｅｍｕｓｔｉｎｅ）０．０００曲氟尿苷（ｔｒｉｆｌｕｒｉｄｉｎｅ）０．０００甲萘醌（ｍｅｎａｄｉｏｎｅ）０．０４８４５９９０２巯嘌呤（ｍｅｒｃａｐｔｏｐｕｒｉｎｅ）０．０５３５７０７８８５０２９７４１７一ＯＯＯＺＢ０．０１１０．００１４５９２０．１１５８０．０４１０．００００．０９２２０８硫鸟苷（ｔｈｉｏｇｕａｎｏｓｉｎｅ）０．００２４１Ｆ０４４７—０１２５０．００３１８０．０８９６９二十二碳六烯酸乙酯（ｄｏｃｏｓａｈｅｘａｅｎｏｉｃａｃｉｄｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ）２６２一ｃｈｌｏｒｏ—Ｎ一（２一ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ）ｙｌｓｕｌｆｏｎｙｌ）ｂｅｎｚａｍｉｄｅ５一（ｐｉｐｅｒｉｄｉｎ一１—０．０９０５００．７８８０．０９０４２７２８２９硫链丝菌素（ｔｈｉｏｓｔｒｅｐｔｏｎ）０．００４５００．７７９０．７７５０．７６９０．０８８２０．０４２Ｏ．１５５７８抗感染药免疫抑制剂，抗增生治疗牛皮癣，免疫抑制剂，治疗原虫疾病，抗炎药，抗肿瘤药抗过敏药，免疫调节剂抗肿瘤药，抗感染药蛋白脱乙酰酶（ＨＤＡＣ）抑制剂，治疗皮肤Ｔ淋巴细胞瘤（ＺＯＩ。ＩＮＺＡ＠）曲古柳菌素（ｔｒｉｃｈｏｓｔａｔｉｎａ）０．００００００．０２４５８麦考酚酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃａｃｉｄ）３０３１３２色甘酸（ｅｒｏｍｏｇｌｉｅｉｅａｃｉｄ）０．１１２８５０．０３０６７０．００００００．７６４０．７５１０．７５００．１０６０．１８７０．１７０９５９阿扎胞苷（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）伏立诺他（ｖｏｒｉｎｏｓｔａｔ）ＮＵ—１０２５３３３４３５３６３７３８３９４０４１４２４３４４Ｏ．１３７２２０．０３５６ｌ０．００９４９０．００２９４ｃｈｌｏｒｉｄｅ）０．０００８５０．０１０４８０．０４２５２Ｏ．０１１９６０．０１４１２０．７３８０．７３７０．７３６０．７３６０．７３６０．７３００．７２２０．７２２０．７１２０．７１００．７０４０．７０２０．１３４９利舍平（ｒｅｓｅｒｐｉｎｅ）苄普地尔（ｂｅｐｒｉｄｉｌ）奋乃静（ｐｅｒｐｈｅｎａｚｉｎｅ）０．０７３６０．０９４０．０５６４７抗高血压药抗心律失常药，抗肿瘤镇定剂甲苄索氯铵（ｍｅｔｈｙｔｂｅｎｚｅｔｈｏｎｉｕｍ丙米嗪（ｉｍｉｐｒａｍｉｎｅ）０．０１５７０．０２２９Ｏ．３１８０．００６０．２２１２５６消毒防腐药抗抑郁药抗肿瘤药（结直肠癌新药）抗炎药抗肿瘤、细菌药，平滑肌松弛剂甲状腺激素及抗甲状腺药降血脂药伊立替康（ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ）氟米龙（ｆｌｕｏｒｏｍｅｔｈｏｌｏｎｅ）小白菊内酯（ｐａｒｔｈｅｎｏｌｉｄｅ）碘塞罗宁（１ｉｏｔｈｙｒｏｎｉｎｅ）ＤＯ０．０１４５６０．０５０７２０．０４２００．１２２５８９７／９９氯贝丁酯（ｃｌｏｆｉｂｒａｔｅ）０．１７７０６０．１３９４万方数据５９４中华眼底病杂志２０１６年１１月第３２卷第６期ＣｈｉｎＪＯｃｕｌＦｕｎｄｕｓＤｉｓ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１６，Ｖ０１．３２，Ｎｏ．６表２ＣＭＡＰ筛选出与ＲＯＰ负相关的小分子化合物和药物成功制备视网膜血管内皮细胞缺氧模型，使用芯片技术对其基因表达谱进行检测，结果发现３２６个差异表达基因，其中１９８个基因上调，１２８个基因下调［８］，为本研究奠定了基础。ＣＭＡＰ是利用小分子药物处理人类细胞后的基因表达差异，建立的一个小分子药物、基因表现与疾病相互关连的生物应用数据库，可以协助研究者在药物开发领域上，快速利用基因表达谱数据比对出疾病高关联性的药物，推论大部分药物分子的主要化学结构，并能归纳出药物分子可能作用的机制方向［１０｜。Ｌａｍｂ等［３］、Ｙａｎｎｉ等［１妇成功利用该数据库探讨了阿兹海默症的治疗药物和四物汤的作用机制。２００６年至今，该数据库已大量应用于肿瘤靶向基因小分子替代物筛选、新药物适应证预测、精确医学药物研发、阐明天然药物药理机制等方面，已成为公认的疾病一基因一药物开发技术平台口。７］。本研究通过ＣｏＣＩ。诱导的视网膜血管内皮细胞缺氧模型模拟ＲＯＰ基因表达谱改变，导入ＣＭＡＰ中比对后筛选出４４种正相关和１８种负相关的小分子化合物和药物作用机制，并将所有化合物和药物作用机制进行文献检索，结果发现环吡酮胺、ＣｏＣｌ。、棉酚和醉茄素Ａ等４种化合物和药物与ＲＯＰ发病类似，主要是诱导细胞缺氧，血管生成，促进活性氧产生［１７－１９］。Ｌｉｎｄｅｎ等［１７３研究表明环吡酮胺能够诱导内源的缺氧诱导因子（ＨＩＦ－１）靶基因的表达，保持ＨＩＦ一１在低氧条件下的稳定性，抑制氧传感蛋白羟化酶的功能，并且发现环吡酮胺能够诱导血管内皮生长因子（ＶＥＧＦ）的转录，提高ｍＲＮＡ和蛋白质的水平，以及导致新生血管生成。本研究与Ｌｉｎｄｅｎ等［１７］分析结果一致，从另一方面也证明了ＣＭＡＰ筛选结果的准确性。经ＣＭＡＰ筛选发现环腺苷酸、去甲骆驼蓬碱、柚皮甙和丙磺舒等４种化合物和药物与ＲＯＰ负相关。负相关的化合物，理论上可以逆转基因表达，从而具有治疗疾病的作用。研究表明，环腺苷酸是多药耐药相关蛋白４的底物，在缺血性新血管形成中扮演重要角色［２叩；去甲骆驼蓬碱能够清除羟基自由基，具有突出的保护作用，能够显著增加细胞的存活率，减少突变的发生［２¨。Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ和Ｍｅｎｔｌｅｉｎ［２２１对２１种化合物抑制ＶＥＧＦ的分泌抑制乳腺癌细胞的增长能力进行测试，发现柚皮甙抑制能力最强；Ｋｅｉｔｈ等［２３］研究表明丙磺舒是一种有机阴离子运输抑制剂，能够抑制细胞外的环腺苷酸进入视网膜色素上皮细胞内，进而抑制色素颗粒的聚合。ＣＭＡＰ技术可以协助快速利用基因表达谱数据比对出疾病高关联性的药物，本研究基于基因表达芯片技术和ＣＭＡＰ技术发现了与ＲＯＰ正相关的４种化合物和药物环吡酮胺、ＣｏＣｌ：、棉酚和醉茄素Ａ以及４种负相关小分子化合物和药物环腺苷酸、去甲骆驼蓬碱、柚皮甙和丙磺舒目前。但未见以上化合物和药物在动物模型或体外细胞模型的研究报道，将来有望万方数据中华眼底病杂志２０１６年１１月第３２卷第６期ＣｈｉｎＪＯｅｕｌＦｕｎｄｕｓＤｉｓ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１６，Ｖ０１．３２，Ｎｏ．６５９５对其进行相关研究，为ＲＯＰ防治药物研发提供理论依据。４参考文献［１３］［ｉ］ｕｄｄｉｎ０ｐｈｔｈａｌｍｏｌＶｉｓｉｏｖｓ．０９—３６５２．Ｓｃｉ，２００９，５０（１１）：５４７９－５４８６．ＤＯＩ：１０．１１６７／［１２］ＨｅｌｌｓｔｒＯｍＡ，ＨａｒｄＡＩ，，ＥｎｇｓｔｒＯｍＥ，ｅｔａ１．Ｅａｒｌｙｗｅｉｇｈｔｇａｉｎｐｒｅｄｉｃｔｓｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｉｎｐｒｅｔｅｒｍｉｎｆａｎｔｓ：ｎｅｗ，ｓｉｍｐｌｅ，ｅｆｆｉｃｉｅｎｔａｐｐｒｏａｃｈｔｏｓｃｒｅｅｎｉｎｇ［Ｊ］．Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ，２００９，１２３（４）：６３８—６４５．ｓｐｅｃｉｅｓａｓＤＯＩ：１０．１５４ｚ／ｐｅｄｓ．２００８—２６９７．Ｕｓｈｉｏ—ＦｕｋａｉＭ，ＡｌｅｘａｎｄｅｒＲＷ．ＲｅａｃｔｉｖｅｏｘｙｇｅｎＭ１，ＥｖａｎｓＳＭ。ＣｒａｆｔＪＲ，ｅｔａ１．Ｉｎｖｉｖｏｉｍａｇｉｎｇｏｆｒｅｔｉｎａｌａｍｅｄｉａｔｏｒｓｏｆａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｓｉｇｎａｌｉｎｇ：ｒｏｌｅｏｆＮＡＤ（Ｐ）Ｈｏｘｉｄａｓｅｈｙｐｏｘｉａｉｎｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ［Ｊ／０１．］．ＳｃｉＲｅｐ。２０１６，６：３１０１１［２０１６—０８—０５］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｍ／ｏｘｙｇｅｎ—ｉｎｄｕｃｅｄｍｏｄｅｌｏｆ［Ｊ］．Ｍｏｌ１－１４３ＱｕｉｍｓｏｎｃｕｒｒｅｎｔＣｅｌｌＢｉｏｃｈｅｍ，２００４，２６４（卜２）：８５—９７．ａｒｔｉｃｌｅｓ／ｓｒｅｐ３１０１１．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ３１０１１．ＳＫ．Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ：ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｐｔｉｏｎｓＪ１．ＮｅｏｎａｔａｌＮｅｔｗ，２０１５，３４（５）：２８４—［２］ＢｅｈａｒｒｙＫＤ，ＶａｌｅｎｃｉａＧＢ，Ｉ。ａｚｚａｒｏＤＲ，ｅｔａ１．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆ２８７．ＤＯＩ：１０．１８９Ｉ／０７３０—０８３２．３４．５．２８４．ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎｓｆｏｒｔｈｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆ［１５］ｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙ［Ｊ］．Ｓｅｍｉｎ［３］Ｐｅｒｉｎａｔｏｌ，２０１６，４０（３）：１８９—２０２．ＤＯＩ：石文静，陈超，胡宝洋，等．新生小鼠视网膜病变的基因表达谱变化［Ｊ］．中华围产医学杂志，２００６，９（６）：３８５—３８８．Ｓｈｉ１０．１０５３／Ｊ．ｓｅｍｐｅｒｉ．２０１５．１２．００６．Ｉ．ａｍｈＪ，ＣｒａｗｆｏｒｄＥＤ，ＰｅｃｋＤ，ｅｔａ１．ＴｈｅＣｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｙｕｓｉｎｇｇｅｎｅ—ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｇｅｎｅｓ，ａｎｄｓｉｇｎａｔｕｒｅｓｔｏｃｏｎｎｅｃｔＷＪ，ＣｈｅｎＣ，ＨｕＢＹ，ｅｔａ１．ＣｈａｎｇｅｏｆｉｎｍｏｕｓｅｗｉｔｈＰｅｒｉｎａｔｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅＭａｐ：ａｎｄｉｔｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｘｙｇｅｎｉｎｄｕｃｅｄｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，［Ｊ］．ＣｈｉｎＪ［１６］Ｔｅａｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００６，３１３（５７９５）：１９２９—１９３５．ＢＡ，Ｐｅｒｅｚ—ＳｏｓａＭ，ＦｏｇａｒｔｙＭｅｄ，２００６，９（６）：３８５—３８８．Ｒ，ＢｒｅｒｅｔｏｎＨＭ，ｅｔａ１．Ｇｅｎｅｏｆｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｔｈｅ［４３ＢｅｌｉｚｄｒｉｏＪＥ，ＳａｎｇｉｕｌｉａｎｏＭ，ｅｔａ１．Ｕｓｉｎｇｍｉｃｒｏａｒｒａｙａｎａｌｙｓｉｓｅａｒｌｙｏｘｙｇｅｎ—ｉｎｄｕｃｅｄｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｉｎｐｈａｒｍａｃｏｇｅｎｏｍｉｃｄａｔａｂａｓｅｓｆｏｒｄｉｓｃｏｖｅｒｉｎｇｐａｔｉｅｎｔ—ｔａｒｇｅｔｇｅｎｅｓｒａｔ［Ｊ］．Ｊ［１７］ｃｉｃｌｏｐｉｒｏｘ７６３．ＯｃｕｌＢｉｏｌＤｉｓＩｎｆｏｒ，２００９，２（４）：１９０—２０１．ｔｈｅｒａｐｙｌ，Ｊ／ＯＩ。］．ＦｒｏｎｔＰｈａｒｍａｃｏｌ，２０１６，７：３１２［２０１６—０９—２９］．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．ａｎｄｓｍａｌｌｍｏｌｅｃｕｌｅｃａｎｄｉｄａｔｅｓｔｏｃａｎｃｅｒＬｉｎｄｅｎＴ，ＫａｔｓｃｈｉｎｓｋｉｏｌａｍｉｎｅＤＭ，ＥｃｋｈａｒｄｔＫ，ｅｔａ１．ＴｈｅａｎｔｉｍｙｃｏｔｉｃＨＩＦ一１ａｌｐｈａｓｔａｂｉｌｉｔｙ。ＶＥＧＦｉｎｄｕｃｅｓ［５］３３８９／ｆｐｈａｒ．２０１６．００３１２．ＹｕＩ。．ＭａＸ，ＺｈａｎｇＩ。，ｅｔａ１．Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎｏｆｎｅｗｄｒｕｇｉｎｄｉｃａｔｉｏｎｓｂａｓｅｄｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓｌ－Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ，２００３，１７（６）：７６１—ＡＧ，ＫｒｕｐｙａｎｋｏｓｔｉｍｕｌａｔｅｓＶＩ．Ｇｏｓｓｙｐｏｌｉｎｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａａｎｄｎｅｔｗｏｒｋｍｏｄｕｌａｒｉｔｙ［Ｊ／０Ｉ，］．ＳｃｉＲｅｐ，［１８３ＡｒｉｎｂａｓａｒｏｖａｉｎｈｉｂｉｔｓＡＹ，Ｍｅｄｅｎｔｓｅｖｔｒａｎｓｐｏｒｔａｎｄ２０１６，６：３２５３０［２０１６－０９—２８］．ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎａｔｕｒｅ．ｃｏｒｎ／ｅｌｅｃｔｒｏｎａｒｔｉｃｌｅｓ／ｓｒｅｐ３２５３０．ＤＯＩ：１０．１０３８／ｓｒｅｐ３２５３０．［６］ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｆｏｒｐｒｅｃｉｓｉｏｎＤｒｕｇＤｅｖ，２０１６，１（３）：２４５—２５３．ＲＯＳｇｅｎｅｒａｔｉｏｎＢｉｏｅｈｅｍｙａｒｒｏｗｉａｌｉｐｏｌｙｔｉｃａｉｎｄｒｕｇＲｅｖＰｒｅｃｉｓｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａ口］．ＯｐｅｎＪ，２０１２，６：ＫｉｍＲＳ，ＧｏｏｓｓｅｎｓＮ，ＨｏｓｈｉｄａＹ．ｅｔａ１．Ｕｓｅｏｆｂｉｇｄａｔａｍｅｄｉｃｉｎｅ［Ｊ］．Ｅｘｐｅｒｔａ１．ＥｌｕｃｉｄａｔｉｎｇＭｅｄ［１９］１１—１５．ＤＯＩ：ｌＯ．２１７４／１８７４０９１Ｘ０１２０６０１００１１．ＨａｈｍＥＲ，ＭｏｕｒａＭＢ，ＫｅｌｌｅｙＥＥ，ｅｔａ１．ＷｉｔｈａｆｅｒｉｎＡ—ｉｎｄｕｃｅｄａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｓｉｓｍｅｄｉａｔｅｄｂｙｒｅａｃｔｉｖｅ［７］ＱｕａｎＹ，Ｉ。ｉＢ，ＳｕｎＹＭ，ｅｔｃａｓｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｏｆｎａｔｕｒａｌｍｅｄｉｃｉｎｅｓｂｙｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｐｒｏｆｉｌｅ：ｆｌｂｉｅｌｕｓｔｅｒｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｅｏｎｓｐｅｃｉｅｓ［Ｊ／ＯＩ．］．ＰＩ。ｏｓＯｎｅ，２０１１，６（８）：２３３５４１２０１１一０８—１０］．ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１３７１／ｊｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２３３５４．ＤＯＩ：ｏｘｙｇｅｎｓｔｕｄｙｃｕｒｃｕｍｉｎＳｉ—Ｗｕ—Ｔａｎｇ［Ｊ］．ＩｎｔＪＭｏｌＳｃｉ，２０１４，１６（１）：５１０—２２０．ＤｏＩ：１０．３３９０／［８］ｉｊｍｓｌ６０１０５１０．Ｉ。ｕｏＸＱ，ＺｈａｎｇｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓＣＹ，ＺｈａｎｇＪＷ，ｅｔａ１．Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｐｏｔｅｎｔｉａｌｌｙｏｆｉｒｏｎｉｎ［２０］１０．１３７１／ｉｏｕｒｎａｌ．ｐｏｎｅ．００２３３５４．ＭａｔｓｕｍｉｙａＷ，ＫｕｓｕｈａｒａＳ，ＨａｙａｓｈｉｂｅｍｏｄｉｆｉｅｓｒｅｔｉｎａｌｖａｓｃｕｌａｒｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｉｎＫ，ｅｔａ１．ＦｏｒｓｋｏｌｉｎｍｉｃｅＭｒｐ４一ｋｎｏｃｋｏｕｔ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ［２１］ＯｐｈｔｈａｌｍｏｌＶｉｓＳｃｉ，２０１２，５３（１３）：８０２９－８０３５．ＤｏＩ：ｇｅｎｅｓｉｎｖｏｌｖｅｄｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｏｆｐｒｅｍａｔｕｒｉｔｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙｂｙｍｉｃｒｏａｒｒａｙａｎａｌｙｓｉｓ１０．１１６７／ｉｏｖｓ．１２—１０７８１．ＭｏｕｒａＤＪ，ＲｉｃｈｔｅｒＭＦ，ＢｏｅｉｒａＪＭ，ｅｔａ１．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆｂｅｔａ—ｃａｒｂｏｌｉｎｅａｌｋａｌｏｉｄｓａｒｅｌ，Ｊ／ＯＩ。］．ＪＯｐｈｔｈａｌｍｏｌ，２０１５，２０１５：５８４８５４［２０１５－１０—１８］．ｒｅｌａｔｅｄｔｏｔｈｅｉｒａｎｔｉｍｕｔａｇｅｎｉｃａｎｄ［９］ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１１５５／２０１５／５８４８５４．Ｄ（）Ｉ：１０．１１５５／２０１５／５８４８５４．Ｅｌ—ＲｅｍｅｓｓｙＡＢ，Ａ１一ＳｈａｂｒａｗｅｙＭ，ＰｌａｔｔＤＨ，ｅｔａ１．ＰｅｒｏｘｙｎｉｔｒｉｔｅｍｅｄｉａｔｅｓＶＥＧＦ’ｓａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｓｉｇｎａｌａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎｖｉａａｎｉｔｒａｔｉｏｎ—ｉｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍｅｃｈａｎｉｓｍｉｎｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＦＡＳＥＢＪ，２００７，２１（１０）：２５２８—２５３９．ａｎｔｉｇｅｎｏｔｏｘｉｃａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ，２００７，２２（４）：２９３—３０２．［２２］ＳｅｈｉｎｄｌｅｒＲ，ＭｅｎｔｌｅｉｎＲ．ＦｌａｖｏｎｏｉｄｓａｎｄｖｉｔａｍｉｎＥｒｅｄｕｃｅｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｔｈｅａｎｇｉｏｇｅｎｉｃｆａｃｔｏｒｆｒｏｍｈｕｍａｎｔｕｍｏｒ１４８２．ｏｆｐｅｐｔｉｄｅｖａｓｃｕｌａｒｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌｇｒｏｗｔｈｃｅｌｌｓ［Ｊ］．ＪＮｕｔｒ，２００６，１３６（６）：１４７７—１＇２３］ＫｅｉｔｈｌｉｐｉｄＬｅｕｋｏｔｍｅｄｉａｔｏｒｓＥｓｓｅｎｔｉｎｉｓｃｈｅｍｉｃＡｃｉｄｓ，ＴＡ，ＲａｄｈａｋｒｉｓｈｎａｎｒｅｔｉｎａｌＶ。Ｍｏｒｅｄｏｅｋｓ，ｅｔａ１．Ｕｐｔａｋｅｏｆ３Ｈ—ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍｂｌｕｅｇｉｌｌＮｅｕｒｏｓｃｉ，２００６，７：８２．［１０］ＨａｒｄｙＰ，ＢｅａｕｃｈａｍｐＭ，ＳｅｎｎｌａｕｂＦ，ｅｔａ１．Ｎｅｗｉｎｓｉｇｈｔｓｉｎｔｏｔｈｅｒｅｔｉｎａｌｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ！ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｃＡＭＰｂｙｐｉｇｍｅｎｔｓｕｎｆｉｓｈ（Ｌｅｐｏｍｉｓｍａｃｒｏｃｈｉｒｕｓ）［Ｊ］．ＢＭＣｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙｌ－Ｊ］．ＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓＪＭ，ＣｌａｒｋｐａｔｈｏｌｏｇｉｃＦａｔｔｙｏｆ２００５，７２（５）：３０卜３２５．（收稿日期：２０１６—０５—１７）ＭＬ，ｅｔａ１．ＴｈｅｒｏｌｅｏｃｕｌａｒＰＧＥ２［ｉ１］ＹａｎｎｉＳＥ，ＢａｒｎｅｔｔｒｅｃｅｐｔｏｒＥＰ４ｉｎ（本文编辑：江影、唐健）ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ［Ｊ］．Ｉｎｖｅｓｔ读者・作者・编者关于论著前言部分的撰写要求论著文章的前言是正文第一部分的一段短文。是论文主题的开场白，又称引言、导言、序言。需要体现三个方面的基本内容：（１）文章主题相关的研究工作的主要背景和理论依据；（２）研究现状，包括已取得的成绩和存在的问题；（３）研究的目的和意义。撰写表达中应注意的问题是：（１）不宜写得太长或太短，一般不要超过３００字；（２）交待背景材料时，勿作详细的历史回顾和综述，不应对主题作广泛的评论，也不宜引用过多的参考文献，仅需列出主要的参考文献；（３）不要涉及本研究将要报道的资料和结论；（４）“国内外尚未见报道”、“首次报道了……”、“达到国际领先水平”、“填补国内外空白”等对论文评价的提法，除非有确实的资料和依据，否则一般不宜采用。本刊编辑部万方数据