2023年11月30日发(作者：)

生化分析的校准及结果溯源性要求

生化分析的校准是检验实验室必不可少的一项工作，其重要性不言而喻。从检验工作

者到临床医生，从患者到家属，生化分析都是非常重要的数据。而生化检测的体系经常受

到很多因素的影响，有时会严重影响结果的准确性，因此按照规定时间校准就显得非常重

要了。

一、校准

校准是操作过程中相当重要的环节，是测试和调整检验系统（如仪器设备、试剂、方

法学参数）的一个过程。校准对于保证实验室检验结果的准确性和可靠性是非常重要的。

仪器的校准是测量结果准确性的基本保证，校准包括校准程序和校准间隔，这两个都

是很重要的。

仪器的校准，比如生化分析仪常用的波长、温度，（反应温度很多要求在 37 ℃，温

度是否准确）；加样量，因为生化的加样都是非常微小的，经常是两三微升，加样精度要

求很高；另外空白吸光度，空白吸光度影响基线的稳定性，基线的稳定性也是非常重要的。

另外的一部分的校准是测定项目的校准，除了仪器校准以外还有设备校准，设备校准

就是项目校准，项目校准通常指的是临床实验室常规进行工作的内容，即每测定一个项目

都要进行校准。

四、校准时间

究竟多长时间要进行一次校准，也是有规定的，通常是基于试剂的稳定性来决定的。

不同项目，生产厂家它的校准周期可能是不一样的。

从这两张图上可以看到上面是总蛋白，下面是甘油三酯，这两个图是每天定标一次，

把定标参数记录下来，可以看到在一定时期内，总蛋白大约是30天，是比较稳定的。有一

段时间，就是30天～40天它是比较稳定的，系数基本是不变的。下边的甘油三酯也可以

看到基本上也是30天～40天基本稳定，这种情况下校准间隔就可以适当的长一些。所以

在实验室里这两个项目，所使用的试剂和方法（分析系统），它的校准间隔就可以定在30

这两张图情况就不一样了，上边这张图是钙，下边是肌酐。可以发现每天的定标系数

都在变化，每天呈系统性的上升，这就说明试剂稳定性不是很好，在这种情况下最长的校

准间隔是24小时，也就是每天都需要重新定标，当然如果偏离的太多，试剂就必须更换，

然后再重新定标，说明这两种试剂的稳定性还是有些问题，尤其是钙。

五、校准方法

（一）单点定标

校准的方法和校准的水平有几种，下图属于单点定标，只有一个浓度点，那么一个浓

图为单点定标和两点定标

（二）两点定标

还有一种方法就是两点校准，两点可以决定一条曲线，所以它是用了两点来决定一个

标准曲线。当用一点校准时，如果高值和低值总是调不好的情况下，可以试着采用两点定

标。两点定标的个特点就是很可能这条曲线是不过零点的，那么我们有很多设备或试剂，

通常是配有校准品，但是另外采用一个零值的点作为第二点校准。零点校准有可能是不过

零点的，那么这种情况下也属于两点定标。

（三）多点定标

在生化仪上现在经常将免疫 的方法 应用用到生化仪上，但是由于它的反应曲线的线

性范围不像化学反应那么好，所以经常用多点定标。而多点定标也要注意，很多生化仪不

是拟合曲线，而是两点之间的连线，那么这种情况跟计算机模拟一条曲线还有所不同。但

图为多点定标

（四）K值

在临床检测过程中经常用酶促反应，很多情况下没有标准品，也不用定标的。我们只

输入一个K值， K值分为理论K值和实际K值，理论K值就是根据光镜、反应体积，加样

量等算出来的。但是实际应用过程中也会有所偏差，每台仪器也会有一定的偏差所以应该

通过实验来进行校准，而使用实际K值。

六、溯源性

临床检验结果的准确性，就是应该具有一种可比性，而这种可比性没有地域的限制，

应该在任何地方来做结果都应该具有可比性。所以就要求实验室的结果具有跨时空的可比

性，在任何时间都是可比的。实现检验结果准确的最有效的手段那么就是建立和保证检验

结果的溯源性，实现检验量值溯源的必要条件，就是具备参考系统。

（一）溯源性定义

测量结果或标准的值通过连续的比较链与一定的参考标准相联系的属性，称为 溯源

性。该参考标准通常是国家或国际标准，比较链中的每一个步骤，每一个环节都有给定的

不确定度。

(二) 溯源性

溯源性是检验结果的属性，或说校准品的值是有溯源性的，而检验过程或校准过程以

及检验方法和程序是不能谈溯源性的。通常可以说一个值、或一个检验结果是具有溯源性

的。而且溯源只用于定量检验结果的描述，不适用于定性检验结果。连续的比较链是指准

确性，准确性就是剂量学级别由低到高的交替出现的测量程序和校准物质。

交替出现的过程，可以看下面这张取自ISO17511经典的溯源图。基本有三个层次，

最下面层次是常规实验室，而中间层次是厂家，最上面的层次是一些专门机构，是区域性

或国家级的专门研究剂量学的机构。整个溯源就是从常规实验室的结果往上溯源，可以溯

源到厂家的校准物质，厂家再往上溯源到二级校准物质，二级校准物质可以溯源到一级校

准物质最后都溯源到统一的国际上公认的SI单位（国际标准单位），这整个过程就是溯源

过程。最右边代表了不确定度，每个校准的环节都有其不确定度。从上到下不确定度逐步

增大，量值的传递都有它的不确定度，而且是每一步都在增加的。

图为溯源图

（三）溯源性的要求

怎样做才能符合溯源性的要求？对于实验室来讲，首先可以使自己的结果直接溯源到

参考物质，比如买GBW（国家标准物质），或者SRM（国际标准物质），这是最好的方法。

但是这种标准物质价格很贵，另外它不能使用常规方法直接测定，通常情况是不能直接测

定的，因为直接测定，靶值可能复线率很差，因为有基质效应。

另外就是与参考方法，或学术团体推荐的方法进行比较，比如一系列的临床标准，用

自己的方法另外再用参考方法，同时做一系列的标本进行比较，看结果的相关性，偏 倚

究竟有多大？是否能够符合实验室的要求。这样做也有困难的地方，就是参考方法是非常

少的，而且参考方法做起来也非常慢，因此可行性也有障碍。

第三，就是参与权威机构组织的实践质量评价活动，对于基层实验室来讲是比较容易

的一项活动。参加尽可能合理的、科学的、有权威机构组织的实践质量评价活动。

（四）参考系统

要达到溯源最主要的就是参考系统的建立，参考系统包括了 参考测量程序（ ISO

15193 ） 、参考物质（ ISO 15194 ）和参考测量实验室（ ISO 15195 ）。 这三个基本

要素，临床检验的参考系统一般情况下是使用二级参考测量程序和二级参考物质。另外还

使用一些国际约定的参考测量程序和国际约定的校准物，这样就能以较理想的参考系统来

达到溯源的目的。

（五）互通性

检验互通性的方法就是用标准物质，一个实验室要证明自己检验结果的准确性可以买

国际标准品，来测量看偏差究竟有多大。但有时国际标准物质，或国家标准物质不适用于

常规方法检测。因为标准物质本身的基质不同，虽然可能都是血清基质，但也可能人为的

添加一些物质，造成一些基质性干扰。对标准物质来讲我们称之为互通性，检验这种互通

性好坏的方法，通常是用两种程序和一定数量的实际病人样品同时测定校准物。这样就能

判别出校准物或标准物质是否和实际的病人样本一样，能够用不同的方法来检测。

图为标准品互通性检测

可以看下面这张图，蓝色的线代表病人样本的测定结果，而红色是这两个标准样品。

在拟合曲线上有一个参考物质在拟合曲线上，说明它的互通性是非常好的，就是这个标准

物质或校准物可以在两个方法上同时使用。但是另有一点没有在拟合曲线上，说明这个校

准物质是有互通性问题存在的，它不能在两个方法上同时使用，或者说值在不同的方法中

是不一样的。这就可以检验出校准物质或标准物质的互通性。所以通常实验室使用校准物

质时，应该注意校准物质是有规定的使用范围的，不能盲目的使用。

（六）溯源性的建立

建立溯源性 用常规测量程序和参考测量程序同时测定足够数量的、有代表性的、分

别取自不同个体的实际新鲜样品，而且对每份样品要进行重复测量，用线性回归的方法分

析两种方法所得结果的接近程度是否可以接受。 另外 溯源性是指全测量范围内的溯源性，

而不是“单点”溯源性， 所以要做不同浓度的样品。

（七）溯源性的作用

溯源性解决测量结果的正确性问题，那么什么是正确性呢？正确性是指大量测量结果

的均值与真值的接近程度或一致程度。是大量实验的结果的均值要趋近于真值，就是正确

性。检测结果的准确度是指单次测量结果与真值的一致程度。准确度对临床实验室来讲受

方法正确度和精密度两者的共同影响。而溯源性只解决方法的正确性问题，不能解决精密

度、线性范围等其他因素的问题。

七、校准和校准验证

生化分析很多实验室是不做校准验证的， 但要做校准。校准验证其实也是一个很重

要的质量保证过程。在生化分析应用建议里面要求实验室应该制定校准程序，规定仪器和

检测项目的校准方法、使用的校准品种类、来源及数量校准间隔，校准验证标准等。

校准验证是对经过校准的分析系统的准确性以及校准效果来进行的一次检验或监督检

查。由国家剂量或相关部门鉴定和校准的自动生化分析仪器应该加贴标志，表明其工作和

校准状态，以及下次校准的时间。那么鉴定和校准的内容应该至少包括波长、反应温度、

加样精度，加样精度，吸光度准确性、基线漂移等。

（一）校准要求

实验室使用的国家药监局（ SFDA ）批准的分析系统，包括仪器、试剂盒、校准品应

该按照生产厂家说明书要求的方法使用指定的校准物进行校准和校准验证以保证其满足预

期用途。

另外，实验室使用自建的或是 SFDA 尚未批准的分析系统时，实验室还要做 以下 评

价工作：

首先，遵循生产厂家（试剂或仪器）的要求，使用指定的校准物（如果提供），在规

定的时间内进行校准；其次，按实验室规定的校准程序进行校准，实验室校准程序应规定

所用校准物的数量、种类和浓度，及校准间隔。校准物应与检验方法学相适应，可能时，

应能溯源至参考方法或参考物质；最后，校准验证结果不满足预期要求时，应进行校准。

（二）校准验证

通常情况下，应当六个月进行一次校准验证，或在发生以下情况时也应当进行校准验

证。比如更换试剂批号，除非实验室能够证明不同批号的试剂不影响检验结果的质量，同

时没有提示室内指控发生偏移或改变，这种情况换批号时可以不做校准验证。但通常情况

下换批号还是鼓励大家做一次校准验证。另外仪器重要部件的保养维护或更换，应当进行

校准验证。质量控制结果失控或其他纠正措施无效时也可以进行校准验证。实验室规定的

校准验证时间达到以后，也要做一次校准验证。另外校准、校准验证过程里的全部数据都

可以方法不同，比如急诊使用干化学，而检验科是使用湿化学，这种情况下应该注意的就

是要做方法学比对。

实验室使用多个分析系统时，应制定系统间检验结果的比对程序，包括比对样本的数

量、种类和浓度范围，测定方式，数据统计方法，偏差可接受标准和比对时间间隔。检验

结果的比对方法可参考 NCCLS EP ～ 9A 进行。实验室应保留比对实验的数据和分析结果。