2023年12月24日发(作者：)

谷丙转氨酶（GPT）活性测定试剂盒使用说明分光光度法正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定货号：BC1550规格：50管/24样产品内容：提取液：液体30mL×1瓶，4℃保存。试剂一：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存；试剂三：液体50mL×1瓶，4℃保存；产品说明：GPT（EC2.6.1.2）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化氨基酸和酮酸转氨基反应，在氨基酸代谢中具有重要作用。此外，哺乳动物肝细胞GPT活性很高，当肝细胞坏死，GPT释放到血液中，血清GPT活性显著增高。因此，GPT被世界卫生组织推荐为肝功能损害最敏感的检测指标。GPT催化丙氨酸和α-酮戊二酸发生转氨基反应，生成丙酮酸和谷氨酸；加入2,4-二硝基苯肼溶液，不仅终止上述反应，而且与酮酸中的羰基加成，生成丙酮酸苯腙；苯腙在碱性条件下呈红棕色，可以在505nm读取吸光值并计算酶活力。需自备的仪器和用品：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。操作步骤：

一、样品测定的准备1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。8000g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。2、血清（浆）样品：直接检测。二、测定操作表1、分光光度计预热30min以上，调节波长至505nm，蒸馏水调零。2、在EP管中加入下列试剂试剂名称（μL）测定管对照管待测样本20试剂一100100混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）预热30min试剂二100100待测样本20混匀后，37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）准确水浴20min

试剂三10001000混匀，室温放置10min，在505nm波长处，测各管吸光度。每个测定管需设一个对照管。三、计算1、以相对吸光值（A测定管-A对照管）为横坐标，相应酶活力单位（U/L）为纵坐标。作标准曲线为：y=（605.07χ2+192.86χ+0.1392）×0.4822、血清中GPT活力(U/L)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）。χ为A测定管-A对照管。3、微生物、细胞或组织中GPT活力(U/g蛋白)=0.482×（605.07χ2+192.86χ+0.1392）÷待测匀浆蛋白浓度（g/L）。χ为A测定管-A对照管。