血清TK1检测对常见恶性肿瘤诊断的临床意义

2024年1月23日发(作者：)

　浙江检验医学2008年第6卷第3期　ZhejiangJournalofLaboratoryMedicine,2008,Vol.6,No.3中图分类号:R446.6　　　　文献标识码:A19血清TK1检测对常见恶性肿瘤诊断的临床意义1111234566徐笑红,张毅敏,束新华,单绿虎,汪子伟,周永列,温怀凯,何　凡,SvenSkon,Ellenhe(1.浙江省肿瘤医院检验科,浙江杭州310032;2.杭州市第一人民医院中心实验室,3.浙江省人民医院检验科,4.温州医学院附属第二医院检)验科,5.浙江省疾病预防控制中心,6.瑞典Karoilnska医学院。　　恶性肿瘤是细胞出现异常增殖的恶性疾病,国内外许多研究表明,细胞质胸腺嘧啶核苷激酶(TK1)表达与细胞异常增殖密切相关[1-3],我们应用印迹免疫2增强化学发光法检测恶性肿瘤患者血清的TK1水平,探讨TK1检测对肿瘤早期诊断及鉴别诊断的意义。1　材料与方法1.1　标本来源　收集2007年4～6月浙江省肿瘤医院就诊患者(所有病例均经病理学检查证实)血清标本254例,其中良性肿瘤20例、癌前期病变10例(宫颈CINⅡ～Ⅲ)、恶性肿瘤224例(鼻咽癌33例、宫颈癌32例、肺癌25例、卵巢癌24例、食管癌22例、胃癌16例、乳腺癌14例、直肠癌10例、结肠癌9例、肝癌7例、恶淋7例及其他恶性肿瘤25例);杭州市第一人民医院红斑狼疮患者血清标本53例;浙江省人民医院、温州医学院附属第二医院及杭州致远体检中心体检血清标本761例,健康对照组无心、肝、肾等实质性脏器病变,非感染传染病患者及孕妇,无激素、抗生素等治疗,无发热、腹泻等症状。标本收集均经医学伦理委员会同意。于清晨空腹抽取静脉血2ml,分离血清,分两管保存于-20℃冰箱备检。1.2　方法　TK1印迹免疫2增强化学发光法试剂盒和CIS21化学发光数字成像分析仪由深圳市华瑞同康生物技术有限公司提供。全部过程实行严格的双盲法操作。方法按说明书采用ECL印迹免疫2增强化学发光法检测系统,TK1检测灵敏度达0.3pmol/L,以TK1测定值2.0pmol/L为标准阈值,>2.0pmol/L为异常。1.3　统计学处理　根据临床资料对恶性肿瘤及癌前期病变与良性肿瘤、红斑狼疮、健康对照组进行分组比较,分析测定结果。计量资料均以x±s表达,各组之间TK1水平的比较用Kruskal2WallisTest,两两比较用Nemenyi检验,数据处理用SPSS15.0。2　结果2.1　癌前期病变、恶性肿瘤、良性肿瘤、红斑狼疮及健康对照组TK1水平的比较,见表1。表1　癌前期病变、恶性肿瘤、良性肿瘤、红斑狼疮及健康对照组TK1水平的比较3组别癌前病变组恶性肿瘤组良性肿瘤组红斑狼疮组健康对照组例数1x±s(pmol/L)2χ值P值3.06±2.292.32±1.891.37±0.841.14±0.790.55±0.44456.56<0.001　　3Kruskal2WallisTest不同组之间TK1水平的比较,差异有统计学意义(P<0.05)。进一步经Nemenyi法进行两两比较,健康对照组与其余各组的差异均有统计学意义(P<0.05),癌前期病变组与其余各组的差异均有统计学意义(P<0.05),恶性肿瘤组与良性肿瘤组、红斑狼疮组与健康对照组的差异有统计学意义(P<0.05)。2.2　应用ROC曲线分析TK1测定对恶性肿瘤鉴别诊断的价值2.2.1　癌前病变组与良性肿瘤、红斑狼疮及健康对照组TK1水平的比较,见表1。虽然本次收集的癌前期病变患者血清标本例数不多,但作为恶性肿瘤早期癌变的重要过程,我们首先选择了以癌前期病变组的血清TK1检测结果,与良性肿瘤、红斑狼疮以及健康对照组的血清TK1检测结果制作ROC曲线得ROC曲线下面积为0.978,表明TK1对癌前期病变诊断价值很高。2.2.2　恶性肿瘤治疗前组+癌前期病变组与良性肿瘤、红斑狼疮及健康对照组TK1水平比较见表2。表2　恶性肿瘤治疗前组+癌前病变组与良性肿瘤、红斑狼疮及健康对照组TK1水平比较3组别癌前病变组+恶性肿瘤治疗前组良性肿瘤组红斑狼疮组健康对照组2例数x±s(pmol/L)χ值P值9120537612.47±1.991.37±0.841.14±0.790.55±0.44285.17<0.0001　　3Kruskal2WallisTest。恶性肿瘤治疗后,肿瘤被手术切除或增殖生长

20浙江检验医学2008年第6卷第3期　ZhejiangJournalofLaboratoryMedicine,2008,Vol.6,No.3　被抗癌药物所抑制,因此选择恶性肿瘤治疗前组+癌前期病变组与良性肿瘤、红斑狼疮及健康对照组制作ROC曲线图得ROC曲线下面积为0.941,表明TK1对癌前病变+恶性肿瘤治疗前组的诊断价值很高。治疗前2.41±2.26(19)2.03±1.33(29)3.16±1.93(41)治疗初期3.53±2.06(8)2.76±1.25(8)3.19±1.82(12)2.2.3　组织学不同的肿瘤不同治疗期TK1水平的比较。根据TK1的半衰期30天,我们将治疗术后<1月或单纯化疗≦2次或放疗计量只有放疗总计量的三分之一定为治疗初期。见表3、表4。治疗中后期2.38±2.44(17)1.37±0.95(18)1.82±1.96(44)复发期3.66±1.94(7)2.28±1.89(2)2.50±0.83(19)表3　鳞癌、腺癌及其它恶性肿瘤不同治疗期TK1水平的比较(pmol/L　x±s,n)鳞癌腺癌其它表4　鳞癌、腺癌及其它恶性肿瘤不同治疗期TK1水平比较的方差分析结果变异来源治疗期别组织分类总误差离均差平方和49.48532.039723.127800.57自由度32218214均方16.49516.0193.317FP值4.9734.8290.0020.009　　经分析得知,不同治疗期TK1水平的差异有统计学意义(P<0.05)。进一步经Bonferroni法进行两两比较,治疗前与治疗中后期组TK1水平的差异有统计学意义(P<0.05),肿瘤复发者血清TK1水平显著高于治疗后组(P<0.05)。鳞癌和腺癌之间TK1水平的差异有统计学意义(P<0.05)。2.2.4　不同治疗方案对恶性肿瘤患者治疗初期和3　讨论治疗中后期血清TK1水平的比较,见表5,表6。表5　单纯治疗与综合治疗后恶性肿瘤患者治疗初期和治疗中后期血清TK1水平的比较(pmol/L　x±s,n)治疗方法化疗组手术组综合治疗组治疗初期3.43±2.00(5)2.65±1.28(16)3.31±1.19(7)治疗中后期2.37±2.46(11)2.58±2.39(27)1.24±0.88(41)随着免疫学及分子生物学的发展,人们已研究开发了多种肿瘤标志物应用于临床,但多数标志物的特异性、敏感性、广谱性方面特别在早期诊断的应[4-7]用上不是很理想或不被推荐。因此,寻找灵敏度高、特异性强的肿瘤标志物一直是我们的目标。[8]早在1960年,Weissman等就证实胸腺嘧啶核苷激酶(简称TK)是合成DNA的嘧啶补救途径激2+酶,DNA合成之前,在ATP为供体和镁离子(Mg)的参与下,催化脱氧胸苷(dThd)为脱氧胸苷酸(dT2MP)。人细胞中TK以两种不同同功酶的形式出现,其中存在于细胞质中的同工酶为细胞质胸苷激酶(简称TK1),存在于线粒体中的同工酶为线粒体胸苷激酶(简称TK2),它的表达与细胞周期无关。TK1是分子量为96KD的四聚体,基因编码位于人体染色体17q21222胸腺嘧啶核苷的位点上。TK1参与细胞周期调控,与细胞分裂密切相关,增殖周期中TK1在细胞分裂的G1期含量比较低,到S期后[9-11]逐渐升高,至G2期达到最高。正常情况下TK1大量存在于胚胎中,胎儿发育后TK1水平逐渐[12]降低,成人体内只存在极微量的TK2,已报道TK1基因经常表现为多型性,推测由于辐照剂量等原因影响染色体不稳定,促使该核苷酸酶进人补救[13,14]途径,可能是致癌的基本原理之一。恶性肿瘤是一种细胞出现异常增殖的恶性疾病,因TK1检测的早期表达、增殖特异性和方法敏感性(其它疾病只有在导致细胞过度增生时才在发病期出现高TK1水平),近年来人们对这一新的细胞增殖标志物进行了广泛的研究,并逐渐应用于临表6　方差分析结果变异来源治疗期别治疗方法总误差离均差平方和14.39421.091303.938350.080自由度12103106均方FP值14.3944.87810.5453.5742.9510.0290.032　　注:因标本例数较少,将放化疗组、手术化疗组及手术放化疗组合并为综合治疗组进行分析。经分析得知,不同治疗期TK1水平的差异有统计学意义(P<0.05)。不同治疗方法TK1水平的差异有统计学意义(P<0.05),进一步经Bonferroni法进行两两比较,手术组与综合组TK1水平的差异有统计学意义(P<0.05),手术组与化疗组TK1水平的差异均无统计学意义(P>0.05)。

　浙江检验医学2008年第6卷第3期　ZhejiangJournalofLaboratoryMedicine,2008,Vol.6,No.321床对恶性肿瘤的鉴别诊断、疗效监控和复发预后的评估,以及对健康人群早期恶性发生肿瘤风险的预[15-18]测。根据表1、表2分析,癌前期病变、恶性肿瘤患者的血清TK1水平与良性肿瘤、非肿瘤致病患者及健康人群比较,有统计学意义,用ROC曲线对TK1结果进行分析,TK1水平检测对恶性肿瘤发病初期及癌前期病变患者具有很高的特异性和敏感性,说明TK1作为恶性肿瘤的检测标志,对恶性肿瘤的早期诊断以及与其它疾病的鉴别诊断方面在临床上具很高的应用价值,而且肿瘤复发者血清TK1水平显著高于治疗后组,说明TK1不仅与肿瘤的组织形态相关,而且对提示肿瘤的复发亦有重要意义。表5,表6显示TK1对肿瘤的不同治疗手段的疗效评估很有价值。本次实验761例健康对照组TK1值为(0.55±0.44)pmol/L,其中阳性7例(4例在CV值10%内),阳性率0.92%,比瑞典肿瘤基金会(SwdeishCancerFund)评估的每年新增肿瘤疾病比率0.5%[3]alDNAflowcytometry[J].MedOncolTumorPharmacother,1984,1(4):211-218.[4]TocchiA,CostaG,LepreL,eofserumandgastricjuicelevelsofcarcinoembryonicantigen,CA19.9andCA72.4inpatientswithgastriccancer[J].JCancerResClinOncol,1998,124(8):450-455.[5]YchouM,DuffourJ,alsignificanceandprognosticval2ueofCA72-4comparedwithCEAandCA19-9inpatientswithgastriccancer[J].DisMarkers,2000,16(3-4):105-110.[6]ASCO,2004.[7]PegramM,icalrationaleforHER2/neu(c-erbB2)asatargetformonoclonalantibodytherapy[J].SeminOn2col,2000Oct,27(5Suppl9):13-19.[8]WeissmanSM,SmellieRMS,sphoryla2tionofthymidine[J].BBA,1960,45∶101-110.[9]HeQ,SkogS,clerelatedstudiesonthymidinekinaseanditsisoenzymesinEhrlichascitestumours[J].CellProlif,1991,24:3-14.[10]KauffmanMG,cleregulationofthymidinekinase:residuesnearthecarboxylterminusareessentialforthespecificdegradationoftheenzymeatmitosis[J].MolCellBiol,1991,11:2583-2546.[11]KePY,cdegradationofhumanthymidinekinase1isdependentontheanaphase2promotingcomplex/cyclosome2CDH12mediatedpathway[J].MolCellBiol,2004,24:514-526.[12]ReichardP,ationofdesoxyribosidesinthesyn2thesisofpolynucleotides[J].SynthesisofPolynucleotides,1951,188(2):839-846.[13]DutrillauxB,ionofincreasedsalvagepathwaysofnucleotidesynthesisbydosageeffectduetochromosomeimbal2ancesmaybefundamentalincarcinogenesis:theexampleofcolor2ectalcarcinoma[J].AnnGenet,1986,29(1):11-15.[14]GillesSI,RomainS,onanalysisinthecodingse2quenceofthymidinekinase1inbreastandcolorectalcancer[J].IntJBiolMarkers,2003,18(1):1-6.[15]HeQ,WangN,terizationofapeptideantibodya2gainstaC2terminalpartofhumanandmousecytosolicthymidinekinase,whichisamarkerforcellproliferation[J].EurJCellBi2ol,1996,70(2):117-124.[16]ZhangF,LiH,inekinase1immunoassay:apoten2tialmarkerforbreastcancer[J].CancerDetectPrev,2001,25(1):8-15.[17]HeQ,ZouL,ZhangPA,nicalsignificanceofthymidinekinase1measurementinserumofbreastcancerpatientsusinganti2TK1antibody[J].IntJBiolMarkers,2000,15(2):139-146.[18]HeQ,ZouL,trationofthymidinekinase1inserum(S2TK1)isamoresensitiveproliferationmarkerinhumansolidtumorsthanitsactivity[J].OncolRep,2005,14(4):1013.(收稿日期:2007211229)略高,对这些检测者我们建议在3～6个月后复检,观察TK1值的动态变化,同时建议受检者在必要时,采用其他相应的肿瘤标志物检测和影像学手段跟踪检查。4　结论综上所述,应用TK1方法检测恶性肿瘤的肿瘤细胞异常增殖度,有着较高的特异性和灵敏度,TK1检测对早期发现恶性肿瘤、与其他疾病的鉴别诊断、复发的发现以及疗效评估具有一定的临床价值。TK1检测方法由于与细胞增殖密切相关,其在肿瘤检测中涉及判别的癌谱较广并早期即有表达,可作为高危人群潜在恶性肿瘤风险的早期预警指标。致谢:感谢浙江大学医学院章明教授等专家、深圳市华瑞同康生物技术有限公司、浙江德尔医疗技术有限公司为研究工作提供的大力支持。参考文献:[1]EissaS.,n&HellMadical[M].Newyork,1998,94-102;134-137.[2]TribukaitB,GustafsonH,andproliferationinhumanbladdertumorsasmeasuredbyflow2cytofluorometricDNA2analysisanditsrelationstohistopathologyandcytology[J].Cancer,1979,43(5):1742-1751.(本文编辑:杨仲国)