2024年8月10日发(作者：)

维普资讯

５０　广东农业科学２００８年第６期　

克克万年青组织培养和快速繁殖技术研究　

张超．陈立思　

（广州化卉研究中心，广东广州５１０３６０）　

摘要：以克克万年青带侧芽的茎段为外植体，进行组织培养及诱导植株再生研究，结果表明：适宜的芽启动培养基为　

ＭＳ＋６一ＢＡ　１．５　ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０５　ｍｇ／Ｌ；最适增殖培养基为１／２ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０　ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１　ｍｇ／Ｌ，增殖系数达３．６倍；适宜　

的生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２　ｍｇ／Ｌ，生根率达８８．５％；生根试管苗移栽到Ｋｌａｓｍａｎｎ泥炭４２２＋Ｋｌａｓｍａｎｎ泥炭４１３（２：１）　

混合基质巾，成活牢高达９４．３％。　

关键词：克克万年青：组织培养；快速繁殖　

中图分类号：￥６８２．１．４：Ｓ６０４　．４　文献标识码：Ｂ　文章编号：１００４—８７４Ｘ（２００８）０６—００５０～０３　

Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈｉａ　

ａｍｏｅｎａ　．Ｋｉｋｉ　

ＺＨＡＮＧ　Ｃｈａｏ，ＣＨＥＮ　Ｌｉ—ｓｉ　

（Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　Ｆｌｏｗｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔ￣，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５　１０３６０，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈｉａ　ａｍｏｅｎａ　ＣＶ．Ｋｉｋｉ　ｗａｓ　ｓｔｕｄｉｅｄ　ｗｉｔｈ　ｓｔｅｍ　ｎｏｄｅｓ　ｗｉｔｈ　ａｘｉｌｌａｒｙ　

ｂｕｄｓ　ｔａｋｅｎ　ａｓ　ｅｘｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ａｘｉｌｌｉａｒｙ　ｂｕｄ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ＭＳ＋６～ＢＡ　１．５　

ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０５　ｍｇ／Ｌ．ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋６－ＢＡ　２．０　ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１　ｍｇ／Ｌ．ａｎｄ　ｅａｃｈ　ｐｌａｎｔ　

ｐｒｏｄｕｃｅｄ　３．６　ｓｈｏｏｔｓ，ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｈｏｏｔ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗａｓ　１／２ＭＳ＋ＩＢＡ　０．２　ｍｇ／Ｌ．ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ　ｗａｓ　８８．５％，　

ｐｌａｎｔｌｅｔｓ　ｓｕｒｖｉｖａｌ　ｒａｔｅ　ｒｅａｃｈｅｄ　９４．３％ｗｈｅｎ　ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄ　ｏｔｌｔｏ　ｔｈｅ　ｍｉｘｅｄ　ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ　ｏｆ　Ｋｌａｓｍａｎｎ　４２２　ａｎｄ　４１　３　ｆ２：１）ｆｏｒ　４２　ｄａｙｓ．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｄｉｅｆｅｎｂａｃｈｉａ　ａｍｏｅｎａ　Ｃｉ：．Ｋｉｋｉ；ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ；ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　

克克万年青（Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈｉａ　ａｍｏｅｎａ　ｃ　．Ｋｉｋｉ）为天南　

星科花叶万年青属植物，叶缘墨绿色，中央有大小不　

等的黄白色斑纹，是极具观赏价值的室内耐阴观叶植　

物。在生产上，花叶万年青属植物主要靠茎段侧芽萌发　

和分株繁殖…，但繁殖系数低、速度慢，很难满足商品　

化生产需求。为此，圉内外许多学者开始探索利用组　

织培养技术快速繁殖花叶万年青属植物，但由于其外　

植体彻底消毒困难、培养周期长及品种差异较大等原　

因，以致进展比较缓慢¨－５］。本研究以克克万年青带侧　

芽的茎段为外植体，建立高效的离体再生体系　以期　

为该品种的种苗工厂化生产提供技术参考。　

ｃｎｌ的带侧芽茎　，用自来水冲洗３０　ｍｉｎ，然后在超净　

Ｔ作台上先用６％次氯酸钠消毒５　ｍｉｎ、无菌水冲洗２　

次，再用０．Ｉ％ＨｇＣ１　（加２滴吐温）消毒１０　ｍｉｎ、无菌水　

冲洗５次。将经灭菌的外植体取出，放在无菌纸上，吸　

干水分，接种于ＭＳ＋６一ＢＡ　１．５　ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．０５　ｍｇ／Ｃ培　

养基中诱导侧芽萌发，建立无菌培养体系。　

１．２丛生芽增殖培养　

１．２－１不同细胞分裂素对芽增殖的影响将初代培养　

的无菌苗接种于附加不同浓度６一ＢＡ（０．５、１．０、２．０、４．０　

ｍｇ／Ｌ）、ＫＴ（０．５、１．０、２．０、４．０　ｍｇ／Ｌ）和２ｉｐ（Ｏ．５、１．０、２．０、４．０　

ｍｇ／Ｌ）的１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０．１　ｍｇ／Ｌ培养基中进行增殖培　

养，每隔４０　ｄ继代１次，连续继代转接３次，统计增殖　

系数和芽高　

１材料和方法　

１．１无菌外植体获得和无菌苗诱导　

于广州花卉研究中心种质资源圃切取温室中春季　

１．２．２不同生长素对芽增殖的影响将初代培养的无　

菌苗接种到分别附加不同浓度ＮＡＡ（０．０５、０．１、０．２、０．５　

ｍｇ／Ｌ）和ＩＢＡ（０．０５、０．１、０．２、０．５　ｍｇ／Ｌ）的１／２ＭＳ＋６一ＢＡ　

生长的克克万年青茎段，剥去外层叶片，切成长约０．５　

收稿日期：２００８—０３—０５　

作者简介：张超（１９７８一），男，硕士，助理农艺师，Ｅ—ｍａｉｈｄａｏｃｈａｏ　

ｚｈａｎｇ＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｅｌｌ　

２．０　ｍｇ／Ｌ培养基中进行增殖培养，每隔４０　ｄ继代转接　

１次，连续继代转接３次，统计增殖系数和芽高。　

１．３生根培养　

维普资讯

５１　

选取生长一致、高约２．５　３．０　ｏｎ的无根试管苗．　

接种于附加不同浓度ＩＢＡ（０．０５、０．１、０．２、０．５　ｍｇ／Ｌ）和　

ＮＡＡ（０．０５、０．１、０．２、０．５　ｍｇ／Ｌ）的１／２ＭＳ培养基中进行生　

根培养，培养３０　ｄ后观察生根情况，统计生根率和平　

均生根数　

基中植株生长正常，但芽增殖系数较低，芽较矮；在添　

加ＫＴ的培养基中，低浓度ｆ０．５—２．０　ｍｇ／Ｌ）处理的植株　

节问生长过长、长势弱，高浓度（４．０　ｍｇ／Ｌ）处理的植株　

生长正常但增殖系数较低；而在添加６一ＢＡ的培养基　

中．浓度为２．０　ｍｇ／Ｌ时的增殖系数最高，且芽生长最　

好。　

在试管苗诱导、丛生芽增殖和试管苗生根培养中　

采用的所有培养基均附加白砂糖３０　ｇ／Ｌ、卡拉胶５．８　由表２可知，随着ＮＡＡ附加浓度的提高，丛生芽　

ｇ／Ｌ，ｐＨ值５．８，培养室温度为（２５＋２）￣ｃ、光照强度为　

２　０００　ｌｘ、光照时间为ｌ６　ｈ／ｄ。　

增殖系数呈先升高后降低的变化趋势．当ＮＡＡ浓度　

为０．１　ｍｇ／Ｌ时增殖系数表现最高，但ＮＡＡ浓度继续　

１．４炼苗与移栽　

将生根的试管苗连瓶置于遮阴率为７０％的温室　

内闭口炼苗，７　ｄ后取出，洗净附着的培养基，放人多　

菌灵１　０００倍溶液中浸泡３０　ｓ，然后移栽于Ｋｌａｓｍａｎｎ　

泥炭４２２＋Ｋｌａｓｍａｎｎ泥炭４１３（２：１）混合基质中，放人遮　

阴棚内覆盖保湿，每隔５　ｄ淋水１次，１５　ｄ后撤去遮阴　

棚进行正常的肥水管理（相对湿度保持在８０％　９０％．　

温度为２３—２５ｏＣ），４２　ｄ后调查移栽成活率。　

２结果与分析　

２ｌ１诱导培养　

克克万年青茎段外植体用６％次氯酸钠消毒５　

ｍｉｎ和０．Ｉ％ＨｇＣ１：消毒１０　ｍｉｎ后，接种在诱导培养基　

上．接种８　ｄ后茎基部明显膨大．２０　ｄ后大部分腋芽开　

始萌动，接种３２　ｄ后腋芽高１～２　Ｏ１ＴＩ、萌发率达９０％左　

右。　

２．２增殖培养　

克克万年青初代培养小芽长至１．５～２．０　ｏｎ时转　

接到附加不同浓度细胞分裂素和生长素的１／２ＭＳ培　

养基中进行增殖培养，研究不同细胞分裂素和生长素　

对芽增殖和生长的影响，结果见表ｌ和表２。　

由表ｌ可知，当６一ＢＡ浓度低至０．５　ｍｇ／Ｌ时，增　

殖系数仅为１．２倍；６一ＢＡ浓度升至２．０　ｍｇ／Ｌ时芽增　

殖效果最好，增殖系数达３．６倍，芽高３．７１　ｃｍ，且芽　

生长迅速、健壮，叶色浓绿；６一ＢＡ浓度达到４．０　ｍｇ／Ｌ　

时。部分植株开始出现叶片黄化、生长畸形的现象；而　

当６一ＢＡ浓度高于４．０　ｍｇ／Ｌ时。丛生芽大量出现玻璃　

化现象，芽节问缩短，叶片展开困难，芽基部　现大量　

愈伤组织团块。由表１还可以看　。随着ＫＴ浓度的　

升高。芽增殖系数逐渐升高，当ＫＴ浓度达４．０　ｍｇ／Ｌ　

时增殖系数最高。达２．４倍，且植株生长正常；而当　

２ｉｐ浓度小于４．０　ｍｇ／Ｌ时芽高和增殖系数差异均不　

明显．但２ｉｐ浓度为４．０　ｍｇ／Ｌ时增殖系数和芽高显著　

降低，但植株均生长正常。６一ＢＡ、ＫＴ和２ｉｐ对克克万　

年青试管苗的增殖效果比较说明，在添加２ｉｐ的培养　

升高时增殖系数逐渐降低，当ＮＡＡ浓度达０．５　ｍｇ／Ｌ　

时靠近培养基的芽切口处产生大量愈伤组织。从表２　

还可以看出，增殖培养基中加入ＩＢＡ，随着附加浓度的　

升高．增殖系数和芽高均出现逐渐降低的变化趋势。　

其中，当ＩＢＡ浓度为０．０５　ｍｇ／Ｌ时，增殖系数和芽高均　

表现最好：当ＩＢＡ浓度为０．５　ｍｇ／Ｌ时，芽基部产生大　

量愈伤组织，部分植株生长畸形。从试管苗生长情况　

来看．ＮＡＡ　０．０５　０．２　ｍｇ／Ｌ处理的试管苗生长健壮，而　

ＩＢＡ　０．０５　０．２　ｍｇ／Ｌ处理的试管苗比较纤细。　

表１　不同细胞分裂素对克克万年青丛生芽增殖的影响　

注：基本培养基为１／２ＭＳ＋ＮＡＡ　０　１　ｍｇ／Ｌ。　

表２不同生长素对克克万年青丛生芽增殖的影响　

注：基本培养基为１／２ＭＳ＋６一ＢＡ　２．０　ｍｓ／Ｌ。　

维普资讯

５２　

综合分析表明，有利于克克万年青增殖的植物生　

长调节剂组合为６一ＢＡ　２．０　ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１　ｍｇ／Ｌ，即最　

２．４炼苗与移栽　

在炼苗温室中闭口炼苗７　ｄ，取出小苗，用自来水　

适增殖培养基为１／２ＭＳ＋６一ＢＡ　２，０　ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１　

ｍｇ／Ｌ，增殖系数可达３．６倍。　

洗净附着的培养基，移栽到Ｋｌａｓｍａｎｎ泥炭４２２和４１３　

ｆ２：１）的混合基质中，然后置于相对湿度为８０％一９０％、　

２．３生根培养　

对生根率的调查结果显示．培养基中附加的ＩＢＡ　

温度为２３　２５℃的环境中培养．　移栽４２　ｄ后成活率达　

９４．３％。　

浓度为０．２　ｍｇ／Ｌ时最有利于克克万年青试管苗生根．　

生根率达８８．５％：而ＮＡＡ浓度为０．５　ｍｇ／Ｌ时最不利于　

３结论与讨论　

本研究结果表明．在克克万年青组培繁殖中，细胞　

试管苗生根，生根率仅为４０．０％：在一定范同内，克克　

万年青生根率随ＩＢＡ浓度升高而逐渐升高，但当ＩＢＡ　

浓度增加到０．５　ｍｇ／Ｌ时．生根率反而显著降低。从　

ＮＡＡ的不同浓度来看，随着ＮＡＡ浓度的升高生根率　

逐渐降低。　

从平均单株生根数来看．培养基中附加的ＩＢＡ　

浓度为０．５　ｍｇ／Ｌ时单株生根数最多可达４．２条，且　

随着ＩＢＡ浓度的升高，平均生根数有增加的趋势；　

而附加ＮＡＡ的单株生根数最多只为２．６条，并随着　

ＮＡＡ浓度的升高．平均生根数表现为先增加后减　

少。　

从根的生长状态来看，ＮＡＡ诱导形成的不定根短　

而粗，当ＮＡＡ浓度大于０．１　ｍｇ／Ｉ　时，芽基部产生较多　

愈伤组织；而在含有ＩＢＡ的培养基中，接种后５￣６　ｄ可　

见不定根原基突起．ＩＢＡ浓度低至０．０５　ｍｇ／Ｌ时根长而　

细弱，当浓度达到０．１～０．２　ｍｇ／Ｌ时根生长健壮，但当浓　

度增加至０．５　ｍｇ／Ｌ时则于接种后８　ｄ可见试管苗基部　

形成较多灰白色致密的愈伤组织。从总体上看，ＩＢＡ有　

利于根的诱导，生根数量多，生长状态好，附加浓度以　

０．２　ｍｇ／Ｌ为宜。　

表３不同生长素种类和浓度对克克万年青幼苗生根的影响　

分裂素的增殖效果大小顺序为：６一ＢＡ＞ＫＴ＞２ｉｐ，而生长　

素ＮＡＡ的增殖效果则优于ＩＢＡ，其中当培养基附加的　

６一ＢＡ浓度为２．０　ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ浓度为０．１　ｍｇ／Ｌ时可获　

得大量生长健壮的丛生芽。王怀宇等［２１研究认为６一ＢＡ　

浓度为ｌ０　ｍｇ／Ｌ时有利于花叶万年青增殖．而本研究　

则显示６一ＢＡ浓度达到４．０　ｍｇ／Ｌ时花叶万年青丛生芽　

已经　现黄叶和生长畸形的现象，更高浓度的６一ＢＡ　

容易导致玻璃化芽产生，同时芽基部会　现大量愈伤　

组织。　

本研究结果还表明，ＩＢＡ诱导克克万年青产生不　

定根的效果比ＮＡＡ更有效，且以ＩＢＡ浓度为０．２　ｍｇ／Ｌ　

时的生根效果最佳：另外，ＩＢＡ诱发的根多而细，而　

ＮＡＡ诱发根少而粗且易产生愈伤组织，该研究结果与　

韩美丽等Ｉ　３ｊ的报道相一致。但张苏锋等　的研究结果表　

明ＮＡＡ比ＩＢＡ更适合玛丽安万年青生根，这可能与　

品种不同有关。　

参考文献：　

【１］朱根发，张远能。邹春萍，等．花叶万年青的组织培养和快　

速繁殖【Ｊｊ．热带亚热带植物学报，１９９９，７（３）：２４３—２４７．　

【２】王怀宁，陈明昭．花叶万年青的组织培养［Ｊ】．植物生理学通　

讯，１９８７，２３ｆ４）：５７．　

［３］韩美丽，唐玉贵，黄华艳．不同品种万年青组培再生体系的　

建立研究『Ｊｊ．广西林业科学，２０００，２９（４）：１７５—１７８．　

【４】周俊辉，刘花全，罗慧君，等．玛丽安万年青茎段培养的污　

染防治『ｊｊ．仲恺农业技术学院学报，２００２，ｌ５（４）：４３—４８．　

［５】Ｖｏｙｉａｔｚｉ　Ｃ，Ｖｏｙｉａｔｚｉ　Ｓ．Ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｈｏｏｔ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ｏｆ　

Ｄｉｅｆｆｅｎｂａｃｈｉａ　ｅｘｏｔｉｃａ　ｃｕｈｉｖａｒ　Ｍａｒｉａｎｎａ　ａｓ　ａｆｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　

ｃｙｔｏｋｉｎｉｎｓ，ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｒｅｃｕｈｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ［Ｊ１．　

Ｓｅｉｅｎｔｉａｌ　Ｈｏｒｔｉｃｕ｜ｔｕｒｅ．１９８９．４０：１６３—１６９．　

【６ｌ张苏锋，赵兴兵，赵冬梅．玛丽安万年青的茎尖培养与快速　

繁殖［ＪＪ．信阳师范学院学报（自然科学版），２０００，１３０）：９５—　

９８