2024年4月28日发(作者：)
(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号
CN 110448691 A
(43)申请公布日
2019.11.15
(21)申请号 2.5
(22)申请日 2019.05.06
(66)本国优先权数据
2.1 2018.05.07 CN
(71)申请人 江苏恒瑞医药股份有限公司
地址 222047 江苏省连云港市经济技术开
发区昆仑山路7号
申请人 苏州盛迪亚生物医药有限公司
(72)发明人 马晨 孙星 廖成 张连山
杨昌永
(51).
A61K
39/395
(2006.01)
A61K
38/20
(2006.01)
A61P
35/00
(2006.01)
权利要求书2页 说明书8页
序列表12页 附图1页
(54)发明名称
抗PD-1抗体联合IL-15蛋白复合物在制备治
疗肿瘤的药物中的用途
(57)摘要
本发明涉及抗PD-1抗体联合IL-15蛋白复合
物在制备治疗肿瘤的药物中的用途。本发明所述
肿瘤选自黑色素瘤、皮肤癌、淋巴瘤、肾细胞癌、
肝癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌、非小细胞肺癌、胶
质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、血癌、B细胞瘤、
多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、
慢性淋巴细胞性白血病、急性随性白血病、皮肤T
细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、尿路上皮/膀胱癌、肺
癌、食道癌、头颈癌、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤和
鳞状细胞头颈癌。PD-1和IL-15联合治疗肿瘤，相
比对单药治疗，可以显著减少肿瘤体积。
C
N
1
1
0
4
4
8
6
9
1
A
CN 110448691 A
权 利 要 求 书
1/2页
1.抗PD-1抗体和IL-15或其蛋白复合物联合在制备治疗肿瘤的药物中的用途，其中所
述肿瘤优选黑色素瘤、皮肤癌、淋巴瘤、肾细胞癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、结直肠癌、非小细胞
肺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、血癌、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B细胞淋巴瘤、霍奇
金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性随性白血病、皮肤T细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、尿
路上皮/膀胱癌、肺癌、食道癌、头颈癌、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤和鳞状细胞头颈癌。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自：AMP-224、
GLS-010、IBI-308、REGN-2810、PDR-001、BGB-A317、Pidilizumab、PF-06801591、
Genolimzumab、CA-170、MEDI-0680、JS-001、TSR-042、Camrelizumab、Pembrolizumab、LZM-
009、AK-103和Nivolumab。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的轻链可变区
包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3所述的
PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示的
HCDR1、HCDR2和HCDR3。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述抗PD-1抗体为人源化抗体。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述人源化抗体的轻链可变区序列为如SEQ ID
NO:10所示的序列或其变体，所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为
A43S的氨基酸变化；重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体，所述变体优选
在重链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为G44R的氨基酸变化。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的
序列或其变体，所述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化，更优选为A43S的氨基
酸变化；重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体，所述变体优选在重链可变区有0-
10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述的人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示
的序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。
8.根据权利要求1所述的用途，其中所述IL-15蛋白复合物由可溶性融合蛋白(I)和可
溶性融合蛋白(Π)组成；其中可溶性融合蛋白(I)包含IL-15多肽或其功能性片段；可溶性
融合蛋白(Π)包含IL-15Rα多肽或其功能性片段；可溶性融合蛋白(I)或可溶性融合蛋白
(Π)上具有一个或多个氨基酸位点突变成Cys，与对应的可溶性融合蛋白(Π)或可溶性融
合蛋白(I)氨基酸位点上突变成的Cys配对形成二硫键。
9.根据权利要求8所述的用途，其中可溶性融合蛋白(Π)还包含Fc片段或其突变体；优
选地，可溶性融合蛋白(Π)由IL-15Rα多肽或其功能性片段连接在Fc片段的N端组成；更优
选地，所述的Fc片段为SEQ ID NO：11。
10.根据权利要求8所述的用途，其中所述的可溶性融合蛋白(I)的序列为SEQ ID NO：
12。
11.根据权利要求8至10任一项所述的用途，其中所述IL-15蛋白复合物的氨基酸Cys突
变位点发生在IL-15多肽或其功能性片段上的L45、Q48、V49、L52、E53、C88或E89上，优选发
生在L52、E53或E89上，更优选L52。
12.根据权利要求8至10任一项所述的用途，其中所述IL-15蛋白复合物氨基酸Cys突变
位点发生在IL-15Rα多肽或其功能性片段上的K34、L42、A37、G38或S40上，优选发生在A37、
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权 利 要 求 书
2/2页
G38或S40上，更优选S40。
13.根据权利要求8至12任一项所述的用途，其中可溶性融合蛋白(Π)的序列选自SEQ
ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16，优选SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：
14。
14.根据权利要求8所述的用途，所述IL-15蛋白复合物选自如下可溶性融合蛋白(I)和
可溶性融合蛋白(Π)的组合：
15.根据权利要求1至14任一项所述的用途，其中所述结直肠癌接受过手术治疗。
16.根据权利要求1至14任一项所述的用途，其中所述结直肠癌接受过5-氟尿嘧啶、亚
叶酸钙、卡培他滨、伊立替康、奥沙利铂、贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、阿柏西普和瑞格
菲尼中一种或多种组合治疗。
17.根据权利要求1至7任一项所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段
剂量选自1-10mg/kg，优选自1mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg，最优选3mg/
kg。
18.根据权利要求1至7任一项所述的用途，其中所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段
剂量选自50-600mg，优选自60mg、100mg、200mg、400mg、600mg，最优选200mg。
19.根据权利要求1、8至14任一项所述的用途，其中所述的IL-15或其蛋白复合物剂量
选自1-100ug/kg，优选自1ug/kg、2ug/kg、3ug/kg、4ug/kg、5ug/kg、6ug/kg、7ug/kg、8ug/kg、
9ug/kg、10ug/kg、11ug/kg、12ug/kg、13ug/kg、14ug/kg、15ug/kg、16ug/kg、17ug/kg、18ug/
kg、19ug/kg、20ug/kg、21ug/kg、22ug/kg、23ug/kg、24ug/kg、25ug/kg、26ug/kg、27ug/kg、
28ug/kg、29ug/kg、30ug/kg、31ug/kg、32ug/kg、33ug/kg、34ug/kg、35ug/kg、36ug/kg、37ug/
kg、38ug/kg、39ug/kg、40ug/kg、41ug/kg、42ug/kg、43ug/kg、44ug/kg、45ug/kg、46ug/kg、
47ug/kg、48ug/kg、49ug/kg、50ug/kg、55ug/kg、60ug/kg、65ug/kg、70ug/kg、75ug/kg、80ug/
kg、85ug/kg、90ug/kg、95ug/kg、100ug/kg。
20.一种药物包装盒，包含有权利要求1-19任意一项所述的有效量的抗PD-1抗体或其
抗原结合片段和IL-15或其蛋白复合物。
21.一种药物组合物，包含有权利要求1-19任意一项所述的有效量的抗PD-1抗体或其
抗原结合片段和IL-15或其蛋白复合物，以及一种或多种可药用的赋型剂、稀释剂或载体。
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说 明 书
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抗PD-1抗体联合IL-15蛋白复合物在制备治疗肿瘤的药物中
的用途
技术领域
[0001]
抗PD-1抗体或其抗原结合片段和IL-15复合物联合在制备治疗肿瘤的药物中的用
途。
背景技术
[0002]
白细胞介素15(IL-15)是Grabstein等人于1994年发现的一种约为12-14kD的细胞
因子，可在机体正常的免疫应答中发挥作用，如促进T细胞、B细胞、自然杀伤(NK)细胞的增
殖。IL-15需通过与其受体结合发挥生物学活性。IL-15受体由三个受体亚基组成：IL-15受
体α(IL-15Rα)、IL-2受体β(IL-2Rβ)和γc。IL-15Rα内含一个Sushi结构域，能与IL-15结合，
并且是使结合后的IL-15发挥生物学功能所必需的。近年发现，IL-15与其受体IL-15Rα形成
复合物后，可显著增强IL-15的生物学活性。
[0003]
由于IL-15在肿瘤免疫治疗领域的良好预期，国内外有不少公司或研究机构在从
事IL-15免疫治疗方面的相关研究，比如CN100334112C(上海海欣生物技术有限公司)专利
所涉及的IL-15-hIgG4Fc同源二聚体蛋白用于抗微生物感染的治疗；CN103370339B公开了
一种IL-15N72D:IL-15RαSu/Fc融合蛋白复合物，其IL-15多肽包含N72D突变，该突变体较原
始IL-15显示减少的对IL-15βγC受体结合活性；WO2016095642A公开了一种IL-15蛋白复合
物，由IL-15多肽和IL-15Rα/Fc组成，其在IL-15和IL-15Rα之间引入二硫键，能够提高分子
稳定性及生物活性，同时也能够简化制备工艺。
[0004]
PD-1抑制剂是当前备受瞩目的新一类肿瘤免疫治疗药物，目前有多家跨国制药公
司在研发针对PD-1/PD-L1信号通路的单克隆抗体，WO2017054646A公开了一种抗PD-1单克
隆抗体的序列和制备方法，该抗体已处于临床Ⅲ期，安全性良好，已报到的临床研究结果已
经显示出其具有一定的抗肿瘤作用([J].Journal of Clinical Oncology 35(2017):
e15572-e15572)。
[0005]
联合用药是影响药物作用的重要因素之一。两种或两种以上药物联合应用时,既
可以产生协同作用,也可以产生拮抗作用。目前抗PD-1抗体已在临床上和多种药物联用治
疗肿瘤，但仍然存在着肿瘤缓解率不高等问题，抗PD-1抗体和IL-15蛋白复合物是否能够成
功应用于临床仍值得深入研究。
发明内容
[0006]
本发明提供一种抗PD-1抗体和IL-15或其蛋白复合物联合在制备治疗肿瘤的药物
中的用途，其中所述肿瘤优选黑色素瘤、皮肤癌、淋巴瘤、肾细胞癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、结
直肠癌、非小细胞肺癌、胶质母细胞瘤、卵巢癌、前列腺癌、血癌、B细胞瘤、多发性骨髓瘤、B
细胞淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性随性白血病、皮肤T细胞淋巴
瘤、T细胞淋巴瘤、尿路上皮/膀胱癌、肺癌、食道癌、头颈癌、B细胞非霍奇金氏淋巴瘤和鳞状
细胞头颈癌。
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[0007]
说 明 书
2/8页
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段选自：
AMP-224、GLS-010、IBI-308、REGN-2810、PDR-001、BGB-A317、Pidilizumab、PF-06801591、
Genolimzumab、CA-170、MEDI-0680、JS-001、TSR-042、Camrelizumab、Pembrolizumab、LZM-
009、AK-103和Nivolumab。
[0008]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述抗PD-1抗体或其抗原结合片段的轻链
可变区包含分别如SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的LCDR1、LCDR2和LCDR3
所述的PD-1抗体的重链可变区包含分别如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示
的HCDR1、HCDR2和HCDR3。
[0009]
其中，前面所述的各CDR序列如下表所示：
[0010]
序列编号
SYMMSSEQID NO：1
TISGGGANTYYPDSVKGSEQID NO：2
QLYYFDYSEQID NO：3
LASQTIGTWLTSEQID NO：4
TATSLADSEQID NO：5
QQVYSIPWTSEQID NO：6
[0011]
优选的，所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段为抗PD-1人源化抗体。
[0012]
优选的，人源化抗体轻链可变区序列为如SEQ ID NO:10所示的序列或其变体；所
述的变体优选在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。所述人源
化抗体重链可变区序列为如SEQ ID NO:9所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变
区有0-10的氨基酸变化；更优选为G44R的氨基酸变化。
[0013]
前述的人源化抗体重、轻链的可变区序列如下所示：
[0014]
重链可变区
[0015]
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFT
ISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSS
[0016]
SEQID NO：9
[0017]
轻链可变区
[0018]
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIK
[0019]
SEQID NO：10
优选的，人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的序列或其变体；所述的变体优选
在轻链可变区有0-10的氨基酸变化；更优选为A43S的氨基酸变化。所述人源化抗体重链序
列为如SEQ ID NO:7所示的序列或其变体；所述变体优选在重链可变区有0-10的氨基酸变
化；更优选为G44R的氨基酸变化。
[0020]
在本发明一个优选的实施方案中，人源化抗体轻链序列为如SEQ ID NO:8所示的
序列，重链序列为如SEQ ID NO:7所示的序列。
[0021]
前述的人源化抗体重、轻链的序列如下所示：
[0022]
重链
5
名称
HCDR1
HCDR2
HCDR3
LCDR1
LCDR2
LCDR3
CN 110448691 A
[0023]
说 明 书
3/8页
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYMMSWVRQAPGKGLEWVATISGGGANTYYPDSVKGRFT
ISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQLYYFDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVK
DYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCP
PCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVS
VLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEW
ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK
[0024]
SEQID NO：7
[0025]
轻链
[0026]
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCLASQTIGTWLTWYQQKPGKAPKLLIYTATSLADGVPSRFSGSGSGT
DFTLTISSLQPEDFATYYCQQVYSIPWTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKV
QWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
[0027]
SEQID NO：8
[0028]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述IL-15蛋白复合物由可溶性融合蛋白
(I)和可溶性融合蛋白(Π)组成；其中可溶性融合蛋白(I)包含IL-15多肽或其功能性片段；
可溶性融合蛋白(Π)包含IL-15Rα多肽或其功能性片段；可溶性融合蛋白(I)或可溶性融合
蛋白(Π)上具有一个或多个氨基酸位点突变成Cys，与对应的可溶性融合蛋白(Π)或可溶
性融合蛋白(I)氨基酸位点上突变成的Cys配对形成二硫键。
[0029]
在本发明一个优选的实施方案中，其中可溶性融合蛋白(Π)还包含Fc片段或其突
变体；优选地，可溶性融合蛋白(Π)由IL-15Rα多肽或其功能性片段连接在Fc片段的N端组
成；更优选地，所述的Fc片段为SEQ ID NO：11。
[0030]
EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSPGK
[0031]
SEQ ID NO：11
[0032]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述的可溶性融合蛋白(I)的序列为SEQ
ID NO：12。
[0033]
NWVNVISDLKKIEDLIQSMHIDATLYTESDVHPSCKVTAMKCFLLELQVISCESGDASIHDTVENLIIL
ANNSLSSNGNVTESGCKECEELEEKNIKEFLQSFVHIVQMFINTS
[0034]
SEQ ID NO：12
[0035]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述IL-15蛋白复合物的氨基酸Cys突变位
点发生在IL-15多肽或其功能性片段上的L45、Q48、V49、L52、E53、C88或E89上，优选发生在
L52、E53或E89上，更优选L52。
[0036]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述IL-15蛋白复合物氨基酸Cys突变位点
发生在IL-15Rα多肽或其功能性片段上的K34、L42、A37、G38或S40上，优选发生在A37、G38或
S40上，更优选S40。
[0037]
在本发明一个优选的实施方案中，其中可溶性融合蛋白(Π)的序列选自SEQ ID
NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15或SEQ ID NO：16，优选SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14。
[0038]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTCSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPAL
6
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说 明 书
4/8页
VHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEISSHESSHGTPS
QTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTTGGGGSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMI
SRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPA
PIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLY
SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
[0039]
SEQ ID NO：13
[0040]
EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSPGKGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTCSLTECVLNKATNVAHWTT
PSLKCIRDPALVHQRPAPPSTVTTAGVTPQPESLSPSGKEPAASSPSSNNTAATTAAIVPGSQLMPSKSPSTGTTEI
SSHESSHGTPSQTTAKNWELTASASHQPPGVYPQGHSDTT
[0041]
SEQ ID NO：14
[0042]
ITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTCSLTECVLNKATNVAHWTTPSLKCIRDPAL
VHQRGGGGSGGGGSEPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWY
VDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSR
EEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL
HNHYTQKSLSLSPGK
[0043]
SEQ ID NO：15
[0044]
EPKSSDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEV
HNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN
QVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQ
KSLSLSPGKGGGGSGGGGSITCPPPMSVEHADIWVKSYSLYSRERYICNSGFKRKAGTCSLTECVLNKATNVAHWTT
PSLKCIRDPALVHQR
[0045]
SEQ ID NO：16
[0046]
在本发明一个优选的实施方案中，所述IL-15蛋白复合物选自如下可溶性融合蛋
白(I)和可溶性融合蛋白(Π)的组合：
[0047]
[0048]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述结直肠癌接受过手术治疗。
[0050]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述结直肠癌接受过5-氟尿嘧啶、亚叶酸
钙、卡培他滨、伊立替康、奥沙利铂、贝伐单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、阿柏西普和瑞格菲尼
中一种或多种组合治疗。
7
[0049]
CN 110448691 A
[0051]
说 明 书
5/8页
在本发明一个优选的实施方案中，所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段剂量选自
1-10mg/kg，优选自1mg/kg、3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg、6mg/kg、10mg/kg，最优选3mg/kg。
[0052]
在本发明一个优选的实施方案中，所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段剂量选自
50-600mg，优选自60mg、100mg、200mg、400mg、600mg，最优选200mg。
[0053]
在本发明一个优选的实施方案中，其中所述的IL-15或其蛋白复合物剂量选自1-
100ug/kg，优选自1ug/kg、2ug/kg、3ug/kg、4ug/kg、5ug/kg、6ug/kg、7ug/kg、8ug/kg、9ug/
kg、10ug/kg、11ug/kg、12ug/kg、13ug/kg、14ug/kg、15ug/kg、16ug/kg、17ug/kg、18ug/kg、
19ug/kg、20ug/kg、21ug/kg、22ug/kg、23ug/kg、24ug/kg、25ug/kg、26ug/kg、27ug/kg、28ug/
kg、29ug/kg、30ug/kg、31ug/kg、32ug/kg、33ug/kg、34ug/kg、35ug/kg、36ug/kg、37ug/kg、
38ug/kg、39ug/kg、40ug/kg、41ug/kg、42ug/kg、43ug/kg、44ug/kg、45ug/kg、46ug/kg、47ug/
kg、48ug/kg、49ug/kg、50ug/kg、55ug/kg、60ug/kg、65ug/kg、70ug/kg、75ug/kg、80ug/kg、
85ug/kg、90ug/kg、95ug/kg、100ug/kg。
[0054]
在本发明优选的实施方案中，所述的抗PD-1抗体或其抗原结合片段以注射的方式
给药，例如皮下或静脉注射，注射前需将抗PD-1抗体或其抗原结合片段配制成可注射的形
式。特别优选的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式是注射液或冻干粉针，其包含
抗PD-1抗体或其抗原结合片段、缓冲剂、稳定剂，任选地还含有表面活性剂。缓冲剂可选自
醋酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、以及磷酸盐中的一种或几种。稳定剂可选自糖或氨基酸，优选
二糖，例如蔗糖、乳糖、海藻糖、麦芽糖。表面活性剂选自聚氧乙烯氢化蓖麻油、甘油脂肪酸
酯、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯，优选所述聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯为聚山梨酯20、40、
60或80，最优选聚山梨酯20。最为优选的抗PD-1抗体或其抗原结合片段的可注射形式包含
抗PD-1抗体或其抗原结合片段、醋酸盐缓冲剂、海藻糖和聚山梨酯20。
[0055]
在本发明还提供了一种治疗的办法，包括向患者施用前述的有效量的抗PD-1抗体
或其抗原结合片段和IL-15或其蛋白复合物。
[0056]
本发明还提供了一种药物套组，或者一种药物包装盒，其中含有前述的有效量的
抗PD-1抗体或其抗原结合片段和IL-15或其蛋白复合物。
[0057]
本发明还提供了一种药物组合物，包含前述的有效量的抗PD-1抗体或其抗原结合
片段和IL-15或其蛋白复合物，以及一种或多种可药用的赋型剂、稀释剂或载体。
[0058]
发明详述
[0059]
一、术语
[0060]
为了更容易理解本发明，以下具体定义了某些技术和科学术语。除显而易见在本
文件中的它处另有明确定义，否则本文使用的所有其它技术和科学术语都具有本发明所属
领域的一般技术人员通常理解的含义。
[0061]
术语“人源化抗体(humanized antibody)”，也称为CDR移植抗体(CDR-grafted
antibody)，是指将小鼠的CDR序列移植到人的抗体可变区框架，即不同类型的人种系抗体
构架序列中产生的抗体。可以克服嵌合抗体由于携带大量小鼠蛋白成分，从而诱导的强烈
的抗体可变抗体反应。此类构架序列可以从包括种系抗体基因序列的公共DNA数据库或公
开的参考文献获得。如人重链和轻链可变区基因的种系DNA序列可以在“VBase”人种系序列
数据库(在因特网/vbase可获得)，以及在Kabat，E.A.等人，
1991Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版中找到。在本发明一个
8
CN 110448691 A
说 明 书
6/8页
优选的实施方案中，所述的PD-1人源化抗体小鼠的CDR序列选自SEQ ID NO:1，2，3，4，5，6。
[0062]
术语“抗原结合片段”，指具有抗原结合活性的Fab片段，Fab‘片段，F(ab’)2片段，
以及与人PD-1结合的Fv片段sFv片段；包含本发明所述抗体的选自SEQ ID NO:1至SEQ ID
NO:6中的一个或多个CDR区。Fv片段含有抗体重链可变区和轻链可变区，但没有恒定区，并
具有全部抗原结合位点的最小抗体片段。一般地，Fv抗体还包含在VH和VL结构域之间的多
肽接头，且能够形成抗原结合所需的结构。也可以用不同的连接物将两个抗体可变区连接
成一条多肽链，称为单链抗体(single chain antibody)或单链Fv(sFv)。本发明的术语“与
PD-1结合”，指能与人PD-1相互作用。本发明的术语“抗原结合位点”指抗原上不连续的，由
本发明抗体或抗原结合片段识别的三维空间位点。
[0063]
本发明所述的“蛋白复合物”或“复合蛋白”是指两个不同的单体蛋白质结合而成
的蛋白。本发明中组成蛋白复合物的“单体蛋白质”(即可溶性融合蛋白(I)、可溶性融合蛋
白(Π))可以是融合蛋白或非融合蛋白。
[0064]
本发明所述的“融合蛋白”是指，通过用基因重组方法、化学方法或其它适当方法
将两个或多个基因的编码区连接，在同一调控序列控制下表达基因重组所得的蛋白质产
物。在本发明的一些实施方案中，可溶性融合蛋白(I)为IL-15或其变体与生物活性多肽如
Fc片段融合或非融合表达得到的单体蛋白质；可溶性融合蛋白(Π)为IL-15Rα或其变体与
生物活性多肽如Fc片段融合或非融合表达得到的单体蛋白质。本发明的融合蛋白中，两个
或多个基因的编码区之间可由编码肽接头的序列于一个或数个位置融合。肽接头也可用于
构建本发明的融合蛋白。
[0065]
本发明所述的IL-15或功能性片段可以是任何IL-15(白介素15)或其突变体，如人
IL-15或非人哺乳动物IL-15或非哺乳动物IL-15。示例性非人哺乳动物如猪、兔、猴、猩猩、
鼠等，非哺乳动物如鸡等。优选为人的IL-15及其功能性片段。人白介素15成熟分子见数据
库UniProtKB，登录号P40933，49-162aa。“IL-15功能性片段”指通过一个或多个氨基酸替
换、增加或者缺失突变获得的对IL-15生物功能有影响或其他性质发生改变的突变体，通过
这类氨基酸变化可以增加或者降低IL-15与其受体IL-15Rα或IL-15Rβ之间的相互作用能
力；或者增加或者降低IL-15生物学活性比如其刺激免疫细胞增殖活性；或者通过氨基酸突
变在IL-15和其受体之间建立共价键或者使共价连接更加稳定等。如IL-15(L52C)，即在52
位上亮基酸L被半胱氨酸C替换，通过该位点和IL-15Rα对应某个氨基酸突替换成C并与之形
成二硫键。
[0066]
本发明所述的IL-15Rα或功能性片段可以是任何物种的IL-15Rα或者其功能性片
段，如人IL-15Rα或非人哺乳动物IL-15Rα或非哺乳动物IL-15Rα。示例性非人哺乳动物如
猪、兔、猴、猩猩、鼠等，非哺乳动物如鸡等。优选人的IL-15Rα，更优选的是人的IL-15Rα胞外
区部分，简称IL-15RαECD，见数据库UniProtKB，登录号Q13261，31-205aa。术语“IL-15Rα功
能性片段”，优选IL-15Rα胞外域片段的缩短形式，即通过一个或多个氨基酸替换、插入或者
缺失突变所得的包含sushi结构域的具有人白介素15受体α活性的分子，如IL-15Rα-sushi+。
[0067]
术语“Fc片段”指的是人免疫球蛋白链恒定区，特别是免疫球蛋白重链恒定区的羧
基端或其中的一部分，无抗原结合活性，是抗体分子与效应分子和细胞相互作用的部位。例
如，免疫球蛋白Fc区可包括重链CH1、CH2、CH3、CH4的两个或更多结构域与免疫球蛋白铰链
区的组合。根据重链恒定区的氨基酸序列，免疫球蛋白可以分为不同的种类，主要有5类免
9
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说 明 书
7/8页
疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。其中一些还可进一步分成亚类(同种型)，如IgG-1、IgG-
2、IgG-3、IgG-4；IgA-1和IgA-2以及不同的基因型。
[0068]
“Fc片段”优选包括至少一个免疫球蛋白绞链区，以及IgG的CH2和CH3区。更优选包
括IgG1的一个CH2结构域，一个CH3结构域和一个免疫球蛋白绞链区，铰链区起始氨基酸位
置可以变动。
[0069]
本发明中所述的“联合”是一种给药方式，是指在一定时间期限内给予至少一种剂
量的抗PD-1抗体或其抗原结合片段和至少一种剂量的IL-15复合物，其中两种物质都显示
药理学作用。所述的时间期限可以是一个给药周期内，优选4周内，3周内，2周内，1周内，或
24小时以内。可以同时或依次给予抗PD-1抗体或其抗原结合片段和IL-15复合物。这种期限
包括这样的治疗，其中通过相同给药途径或不同给药途径给予给予抗PD-1抗体或其抗原结
合片段和IL-15复合物。
附图说明
[0070]
图-15融合蛋白和PD-1单独或联合给药对小鼠肿瘤体积的影响。
[0071]
图-15融合蛋白和PD-1单独或联合给药对小鼠体重的影响。
具体实施方式
[0072]
以下结合实施例用于进一步描述本发明，但这些实施例并非限制本发明的范围。
[0073]
1、实验目的：本实验在人PD-1转基因小鼠皮下接种小鼠MC38系结肠癌细胞建立肿
瘤模型，通过肿瘤的体积及小鼠体重来评价联合用药对抗肿瘤作用及其安全性。联合药物
治疗是腹腔给予一定剂量的抗PD-1抗体，同时静脉注射一定剂量的IL-15融合蛋白。
[0074]
2、实验材料和方法：
[0075]
2.1实验动物和材料：
[0076]
人PD-1转基因小鼠：42只，由Cephrim公司动物中心繁殖，原始的3对人PD-1转基因
小鼠购自英国的Isis公司，SPF级饲养。
[0077]
溶媒：5％葡萄糖，PBS
[0078]
人IgG：来自血清(Sigma-Aldrich)，产品编号：I4506-50MG
[0079]
抗PD-1抗体：其重、轻链的序列如本发明中SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：8，冻干粉，
注射用水溶解后，再用5％葡萄糖稀释，最终浓度为0.3mg/ml，批号P1636。IL-15融合蛋白：
由江苏恒瑞医药提供，序列如编号3所述，其由可溶性融合蛋白(I)(SEQ ID NO：12)和可溶
性融合蛋白(Π)(SEQ ID NO:15)组成，注射用水溶解后，再用PBS稀释，最终浓度为25μg/
ml，批号P1640。
[0080]
MC38细胞：DMEM培养基，10％胎牛血清，37℃，5％CO
2
培养。选择用于植入的细胞符
合以下四个标准：1)快速生长；2)传代次数少；3)接种前一天更换培养基和4)具有高生存
力。
[0081]
2.2实验方法：
[0082]
在接种当天收获MC38细胞，将细胞(5x10
5
)接种于42只人PD-1转基因小鼠(雌雄都
有)右肋部皮下，待小鼠平均肿瘤体积达到100mm
3
左右时，选取32只，随机分成4组，每组8
只。分组后根据方案给予腹腔注射(IP)抗PD-1抗体，及静脉注射(IV)IL-15融合蛋白。每周
10
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说 明 书
8/8页
两次测量肿瘤体积，称体重，记录数据，肿瘤体积变化率见图1，小鼠体重变化率见图2。
[0083]
2.3实验分组及给药方案
[0084]
表1：实验分组及给药方案
[0085]
分组剂量给药方案给药方式
对照(hIgG和溶媒)3mg/kgQ2D×7IP
PD-13mg/kgQ2D×7IP
IL-15融合蛋白5μg/只QW×3IV
PD-1+IL-15融合蛋白3mg/kg+5μg/只Q2D×7+QW×3IP+IV
[0086]
注：Q2D×7：两天一次，给药7次；QW×3：一周一次，给药3次；
[0087]
3、数据表达和统计学处理
[0088]
各组动物的体重、肿瘤体积及瘤重，数据用平均值±标准差(Mean±SEM)表示，T-
test对数据进行统计学分析。肿瘤体积计算公式：体积＝0.5236×长×短×高4、实验结果
[0089]
表2.肿瘤体积(mm
3
)
[0090]
组1
组2
组3
组4
[0091]
**p<0.01vs.组1；#P<0.05vs组3。
[0093]
结论：与对照组相比，PD-1和IL-15联合给药肿瘤体积抑制率显著上升，小鼠体重
变化基本相同。
[0092]
11
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序 列 表
1/12页
序列表
<110> 江苏恒瑞医药股份有限公司
苏州盛迪亚生物医药有限公司
<120> 抗PD-1抗体联合IL-15蛋白复合物在制备治疗肿瘤的药物中的用途
<160> 16
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 1
Ser Tyr Met Met Ser
1 5
<210> 2
<211> 17
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 2
Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 3
<211> 7
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 3
Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5
<210> 4
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 4
Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp Leu Thr
1 5 10
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
12
CN 110448691 A
序 列 表
2/12页
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 5
Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 6
Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp Thr
1 5
<210> 7
<211> 443
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(443)
<223> 重链序列
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala
115 120 125
Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu
130 135 140
Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly
13
CN 110448691 A
序 列 表
3/12页
145 150 155 160
Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser
165 170 175
Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu
180 185 190
Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr
195 200 205
Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro
210 215 220
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
225 230 235 240
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
245 250 255
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
260 265 270
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
275 280 285
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
290 295 300
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
305 310 315 320
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
325 330 335
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
340 345 350
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
355 360 365
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
370 375 380
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
385 390 395 400
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
405 410 415
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
420 425 430
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440
<210> 8
<211> 214
14
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序 列 表
4/12页
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(214)
<223> 轻链序列
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 9
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
15
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序 列 表
5/12页
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(116)
<223> 重链可变区
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Met Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Gly Gly Gly Ala Asn Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gln Leu Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> PEPTIDE
<222> (1)..(10)
<223> 轻链可变区
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Leu Ala Ser Gln Thr Ile Gly Thr Trp
20 25 30
Leu Thr Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Thr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
16
CN 110448691 A
序 列 表
6/12页
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Ile Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
17
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序 列 表
7/12页
225 230
<210> 12
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Asn Trp Val Asn Val Ile Ser Asp Leu Lys Lys Ile Glu Asp Leu Ile
1 5 10 15
Gln Ser Met His Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Thr Glu Ser Asp Val His
20 25 30
Pro Ser Cys Lys Val Thr Ala Met Lys Cys Phe Leu Leu Glu Leu Gln
35 40 45
Val Ile Ser Cys Glu Ser Gly Asp Ala Ser Ile His Asp Thr Val Glu
50 55 60
Asn Leu Ile Ile Leu Ala Asn Asn Ser Leu Ser Ser Asn Gly Asn Val
65 70 75 80
Thr Glu Ser Gly Cys Lys Glu Cys Glu Glu Leu Glu Glu Lys Asn Ile
85 90 95
Lys Glu Phe Leu Gln Ser Phe Val His Ile Val Gln Met Phe Ile Asn
100 105 110
Thr Ser
<210> 13
<211> 417
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile Trp Val
1 5 10 15
Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn Ser Gly
20 25 30
Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val Leu Asn
35 40 45
Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys Cys Ile
50 55 60
Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser Thr Val
65 70 75 80
Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro Ser Gly
85 90 95
Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala Ala Thr
18
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序 列 表
8/12页
100 105 110
Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys Ser Pro
115 120 125
Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His Gly Thr
130 135 140
Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser Ala Ser
145 150 155 160
His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr Thr Gly
165 170 175
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys
180 185 190
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
195 200 205
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
210 215 220
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
225 230 235 240
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
245 250 255
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
260 265 270
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
275 280 285
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
290 295 300
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
305 310 315 320
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
325 330 335
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
340 345 350
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
355 360 365
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
370 375 380
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
385 390 395 400
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
405 410 415
19
CN 110448691 A
序 列 表
9/12页
Lys
<210> 14
<211> 417
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
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Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Ile Thr Cys Pro Pro Pro Met Ser Val Glu His Ala Asp Ile
245 250 255
Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn
20
CN 110448691 A
序 列 表
10/12页
260 265 270
Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val
275 280 285
Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys
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Cys Ile Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg Pro Ala Pro Pro Ser
305 310 315 320
Thr Val Thr Thr Ala Gly Val Thr Pro Gln Pro Glu Ser Leu Ser Pro
325 330 335
Ser Gly Lys Glu Pro Ala Ala Ser Ser Pro Ser Ser Asn Asn Thr Ala
340 345 350
Ala Thr Thr Ala Ala Ile Val Pro Gly Ser Gln Leu Met Pro Ser Lys
355 360 365
Ser Pro Ser Thr Gly Thr Thr Glu Ile Ser Ser His Glu Ser Ser His
370 375 380
Gly Thr Pro Ser Gln Thr Thr Ala Lys Asn Trp Glu Leu Thr Ala Ser
385 390 395 400
Ala Ser His Gln Pro Pro Gly Val Tyr Pro Gln Gly His Ser Asp Thr
405 410 415
Thr
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<211> 315
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85 90 95
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
100 105 110
21
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序 列 表
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Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
115 120 125
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Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
275 280 285
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
290 295 300
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
305 310 315
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<211> 315
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
22
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序 列 表
12/12页
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
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245 250 255
Trp Val Lys Ser Tyr Ser Leu Tyr Ser Arg Glu Arg Tyr Ile Cys Asn
260 265 270
Ser Gly Phe Lys Arg Lys Ala Gly Thr Cys Ser Leu Thr Glu Cys Val
275 280 285
Leu Asn Lys Ala Thr Asn Val Ala His Trp Thr Thr Pro Ser Leu Lys
290 295 300
Cys Ile Arg Asp Pro Ala Leu Val His Gln Arg
305 310 315
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说 明 书 附 图
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图1
图2
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