2024年5月8日发(作者：)
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６７６ 中国美容医学２００８年５月第１７卷第５期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｍａ１ ｏｆＡｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｍａｖ．２００８．Ｖｏ１．１７．Ｎｏ．５
三维网状结构 。ＶＥＧＦ被明胶吸附并包裹于微球中，随着明
胶的降解，实现ＶＥＧＦ在体内的控制释放。而且在冻干过程
［２］Ｓｔｅｐｎｉｃｋ ＤＷ，ＰｅｔｅｒｓｏｎＭＫ，Ｂｏｄｇａｎ Ｃ，ｅｔ ａ１．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｔｕｍｏｒ
ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ａｌｐｈａ ａｎｄ ｖａｓｃｕｌａｒ ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ ｆａｃｔｏｒ ｏｎ
中，明胶还可以取代水而与多肽形成氢键来稳定多肽的天然
构象，从而保护因子活性。将ＶＥＧＦ的明胶缓释微球应用于大
鼠背部皮瓣模型可以显著促进皮瓣的存活率，明胶微球的应
用促进了ＶＥＧＦ的促血管新生作用，使用ＶＥＧＦ明胶微球后皮
瓣中部的血流量明显高于单纯使用ＶＥＧＦ和盐水对照组，在
术后７天效果最为显著，与缓释微球的生物学特性符合一
ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｓａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｒａｂｂｉｔ ｅａｒ ｆｌａｐ［Ｊ］．Ａｒｃｈ Ｏｔｏｌａｒｙｎｇｏｌ Ｈｅａｄ
Ｎｅｃｋ Ｓｕｒｇ ｌ９９５：ｌ２ｌ（６）：６６７．
［３］Ｋｈａｎ Ａ，Ａｓｈｒａ￣ｏｕｒ Ｈ，Ｈｕａｎｇ Ｎ，ｅｔ ａ１．Ａｃｕｔｅ ｌｏｃａｌ ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ
ＶＥＧＦ１ ６５ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｆｏｒ ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｋｉｎ ｆｌａｐ ｖｉａｂｉｌｉｔｙ：ｅｆｉｃａｃｙ ｆ
ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ［Ｊ］．Ａｍ Ｊ Ｐｈｙｓｉｏｌ Ｒｅｇｕｌ Ｉｎｔｅｇｒ Ｃｏｍｐ Ｐｈｙｓｉｏｌ，
２００４，２８７（５）：Ｒ１２１９．
［４］Ｎｉｍｎｉ ＭＥ．Ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒｓ：ｔｒｇｅｔａｅｄ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍｓ［Ｊ］．
Ｂｉｏ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ．１９９７．１８：１２０１．１２２５．
致。组织学检测也同样验证了上述论断，使用了缓释微球的
皮瓣其血管数目显著增加，管腔增粗，皮瓣存活质量也比对
照组质地柔软，弹性较好。而且皮瓣中部的血流量也得到了
明显提高，ＶＥＧＦ微球的治疗效果优于单纯使用ＶＥＧＦ。
本实验显示缓释微球能显著延长ＶＥＧＦ的作用效果，能
显著增加皮瓣与受区的血管新生，增加皮瓣的血流量，从而
促进皮瓣的存活率及生存质量，但如何提高微球的载药率、
延长微球的缓释作用还需进一步研究，为其早日应用于临床
奠定坚实的基础。
［参考文献］
［１］ＬｉｎＰ，Ｓａｎｋａｒ Ｓ，ｅｔ ａ１．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｇｒｏｗｔｈ ｂｙ ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｔｕｍｅｒ
ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｕｍ ｕｓｉｎｇ ａ ｓｏｌｕｂｌｅ ｖａｓｃｕｌａｒ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ
［５］隋继强，韩岩，吴红，等．人表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长
因子纳米缓释剂对成纤维细胞的影响［Ｊ］．中国美容医学，２００６，ｌ５
（１２）：ｌ３４２・ｌ３４５．
［６］Ｋａｗａｉ Ｋ，Ｓｕｚｕｋｉ Ｓ，Ｔａｂａｔａ Ｙ，ｅｔ ａ１．Ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｔｉｓｓｕｅ
Ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｓｉｃ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ ｇｒｏｗｔｈ
ｆａｃｔｏｒ－ｉｍｐｒｅｇｎａｔｅｄ ｇｅｌａｔｉｎ ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ ｉｎｔｏ ａｒｔｉｉｆｃｉａｌ ｄｅｎｎｉｓ［Ｊ】．
Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，２０００，２ｌ（５）：４８９－４９９．
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ｓｐｈｅｒｅｓ ａｓ ａ ｄｒｕｇ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｓｙｓｔｅｍ
Ｂｉｏｐｈａｒｍ．１ ９９９．４７：ｌ ５３．
［Ｊ］．Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｊ Ｐｈａｒｒｎ ａｎｄ
［收稿日期］２００７—１２一ｌ７［修回日期］２００８—０３一ｌ１
编辑／张惠娟
ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｃｅｌｌ Ｇｒｏｗｔｈ Ｄｉｆｆｅｒ １９９８，９（１）：４９—５８．
・
论著・
骨髓间充质干细胞对豚鼠皮肤光老化治疗作用的研究
姚春丽，苏冠方
（吉林大学第二医院整形美容激光科吉林长春１ ３００４１）
［摘要］目的：探讨骨髓问充质干细胞（Ｂｏｎｅ Ｍａｒｒｏｗ Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ Ｃｅｌ ｌ Ｓ，ＢＭＳＣｓ）皮肤光老化的修复作用，为皮肤光老化的
治疗提供新的治疗途径。方法：ＵＶＡ，ＵＶＢ紫外线灯同时照射豚鼠，每天２ｈ，连续照射５０天，制备皮肤光老化模型；紫外线照射２
周后，在豚鼠皮肤照射区，局部多点皮内注射ＤＡＰＩ标记的第３代豚鼠ＢＭＳＣｓ ０．８ｍｌ（１ Ｘ １ ０ｓ个／ｍ１），每周一次。注射后２４ｈ、５
天及１ ０天观察豚鼠皮肤变化，同时取照射区的皮肤制备冰冻切片，激光共聚焦显微镜下观察ＤＡＰＩ标记的ＢＭＳＣｓ在紫外线照射
区皮肤组织内的迁徙及定居情况。结果：与对照组相比，随照射时问的延长，未治疗组皮肤光老化症状逐渐加深，出现皱纹，皮
肤松弛、修复性增厚，皮屑，色素沉积，皮革样外观；ＢＭＳＣｓ治疗纽在治疗前出现的症状与未治疗纽相同，治疗后上述症状逐渐消
失，未出现色素沉着。激光共聚焦显微镜下观察，注射后２４ｈ，ＢＭＳＣｓ出现在真皮层；注射后５天ＢＭＳＣｓ出现在真皮层以及毛囊
等组织；注射后１ ０天广泛弥散在皮肤各层，包括角质层。结论：ＢＭＳＣｓ对皮肤光老化有明显的延缓及修复作用。
［关键词］皮肤光老化；骨髓间充质干细胞；激光共聚焦显微镜
［中图分类号】ＱＳ１ ３．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００８—６４５５（２００８）０５—０３
Ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ ｃｕｒｉｎｇ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ ｏｆ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｓｋｉｎ
ＹＡＯ Ｃｈｕｎ—ｌｉ，ＳＵ Ｇｕａｎ－ｆａｎｇ
（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｌａｓｅｒ Ｃｏｓｍｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｐｌａｓｔｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ ｏｆ ｔｈｅ ２ｒｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｊｉｌｉｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ．Ｊｉｌｉｎ １３００４１，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ
Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌＩｓ（ＢＭＳＣｓ）ｃｕｒｉｎｇ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ ｏｆ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｓｋｉｎ
ｔｏ ｐｒｏｖｉｄｅ ａ ｎｅｗ ｗａｙ ｏｆ ｃｕｒｉｎｇ ｓｋｉｎ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉ ｒｒａｄｉａｔｅｄ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇｓ ２ ｈｏｕｒｓ ｐｅｒ ｄａｙ ｆｏｒ ５０ ｄａｙｓ ｕｓｉｎｇ
ＵＶＡ ａｎｄ ＵＶＢ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｏｒ ｔｏ ｅｓｔａｂｌｉｓｈ ｓｋｉｎ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ ｍｏｄｅ１．Ａｆｔｅｒ ２ ｗｅｅｋ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ｅｘｅｃｕｔｅｄ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｉｎｔｒａｄｅｒｍａｌ
维普资讯
中 羞容 ２００８年５ 第１７卷第５期Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｅｓｔｈｅｔｉｃ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｍａｙ．２００８．Ｖｏ１．１７．Ｎｏ．５ ６７７
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｉｒｄ—ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ＢＭＳＣｓ（Ｏ．８ｍｌ，１×１Ｏ５／ｍＩ）ｍａｒｋｅｄ ｂｙ ＤＡＰＩ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｒｅａ ｏｆ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ
ｓｋｉｎ ｅｖｅｒｙ ｗｅｅｋ．Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ２４ｈ．５ｄ ａｎｄ １Ｏｄ ａｆｔｅｒ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．ａｎｄ ｍａｋｅｄ ｆｒｏｚｅｎ ｓｅｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ
ａｒｅａ ｏｆ ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｓｋｉｎ．Ｏｂｓｅｒｖｅｄ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｅｃｅｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ＢＭＳＣｓ ｍａｒｋｅｄ ｂｙ ＤＡＰＩ ｉｎ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ ｒａｄｉａｔｉｏｎ ａｒｅａ ｏｆ
ｇｕｉｎｅａ ｐｉｇ ｓｋｉｎ ｂｙ ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ，ｓｋｉｎ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ
ｓｙｍｐｔｏｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏ－ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｗｉｔｈ ｉｒｒａｄｉｔｉｖｅ ｔｉｍｅ，ｗｒｉｎｋｌｅｓ，ｃｕｔｉｓ ｌａｘａ，ｓｃｕｒｆ ｒｅｐａｒａｔｉｖｅ ｔｈｉｃｋｅｎｉｎｇ，
ｐｉｇｍｅｎｔ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｎｄ ｌｅａｔｈｅｒ ａｐｐｅａｒａｎｃｅ ａｐｐｅａｒｄ．Ｔｈｅ ｓａｍｅ ｓｙｍｐｔｏｍ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ ｇｒａｄｕａｌｌｙ ｄｉｓｓａｐｐｅｒｅｄ
ａｎｄ ｎｏ ｐｉｇｍｅｎｔ ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ ａｐｐｅａｒｄ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐ．Ｕｓｉｎｇ ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ ｔｈｅ ＢＭＳＣｓ
ｍａｒｋｅｄ ｂｙ ＤＡＰ１ ｗｅｒｅ ｏｂｓｅｒｖｅｄ ａｐｐｅａｒｉｎｇ ｉｎ ｄｅｒｍｉｓ ２４ｈ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ａｐｐｅａｒｉｎｇ ｉｎ ｄｅｒｍｉｓ，ｈａｉｒ ｆｏｌｌｉｃｌｅ，ｅｔｃ，５ｄ ａｆｔｅｒ
ｔｈｅ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ，ｂｅｃｏｍｉｎｇ ｄｉｓｐｅｒｓｅｄｌｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｎｔｉｒｅ ｌａｙｅｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｓｔｒａｔｕｍ ｃｏｒｎｅｕｍ １０ｄ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ
ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ ＢＭＳＣｓ ｃｏｕｌｄ ｏｂｖｉｏｕｓｌｙ ｄｅｌａｙ ａｎｄ ｃｕｒｅ ｓｋｉｎ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ．
Ｋｅｙ ｗｏ ｒｄｓ：ｓｋｉｎ ｐｈｏｔｏａｇｉｎｇ；ｂｏｎｅ ｍａｒｒｏｗ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌｓ（ＢＭＳＣｓ）；ｌａｓｅｒ ｓｃａｎｎｉｎｇ ｃｏｎｆｏｃａｌ ｍｉｃｒｏｓｃｏｐｅ
Ｅｉ－Ｄｏｍｙａｔｉ Ｍ等ｎ 研究发现，在日光保护部位，皮肤Ｉ
血清（ＦＢＳ）的ＤＭＥＭ培养液，置于３７℃，５％Ｃ０ 培养箱中，每周
型胶原和ＩＩＩ型胶原只有到８０岁以后才表现出减少，但在日 换液２次。待细胞达８０％￣９０％融合时，用０．２５％胰蛋白酶消
光曝露部位１０岁时已减少２０％左右，到９０岁时减少５０％左 化，按１：２传代，传到３代备用。
右，而且曝露部位的胶原纤维结构在４０岁后出现紊乱。而
ｌ＿５ ＤＡＰＩ标记的ＢＭＳＣｓ对豚鼠皮肤光老化的治疗：称取
Ｆａｔｈｋｅ ｃ［２ 研究证实，损伤的皮肤是ＢＭＳＣｓ的靶组织，ＢＭＳＣｓ ＤＡＰＩ ５．Ｏｍｇ，溶于１．４２７ｍｌ二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）中，再加入
能够缩短Ｉ型和ＩＩＩ型胶原的转录，ＢＭＳＣｓ治疗皮肤创伤的 ７１３ｍｌ ＤＭＥＭ，混匀，作为ＤＡＰＩ应用液备用。收集培养第３代
作用比公认的ＣＤ４５＋细胞亚群的作用更大。但ＢＭＳＣｓ用于治
的豚鼠ＢＭＳＣｓ，用ＤＭＥＭ洗涤２次，加入ＤＡＰＩ应用液ｌＯｍｌ／
疗皮肤光老化未见报道。因此，本研究在皮肤光老化模型豚
瓶，置于３７℃，５％Ｃ０。培养箱中，１ｈ后，弃去ＤＡＰＩ应用液，用
鼠紫外线照射区皮内局部注射ＤＡＰＩ标记的ＢＭＳＣｓ，观察 ＤＭＥＭ洗涤２次，加入含１５ 胎牛血清的ＤＭＥＭ，继续培养。２４ｈ
ＢＭＳＣｓ细胞在光老化皮肤内迁徙、定居以及对光老化组织的 后，荧光显微镜下观察细胞，确认标记成功后，收集细胞，调
修复作用，为皮肤光老化的预防和治疗提供理论依据和实验
整细胞浓度为１×１０ｓ个／ｍｌ。紫外线照射２周后，在豚鼠皮
数据。
肤照射区局部多点皮内注射０．８ｍｌ上述细胞。注射后２４ｈ、５
天、１０天观察照射区皮肤变化，并处死豚鼠，取紫外线照射区
１材料和方法
的皮肤制备冰冻切片，在激光共聚焦显微镜下观察ＤＡＰＩ标
１＿１主要试剂和仪器：ＤＭＥＭ（ＳｃｉｅｎＣｅｌ１，美国），胎牛血清
记的ＢＭＳＣｓ的分布。
（Ｈｙｃｌｏｎｅ公司，美国），二甲基亚砜、ＤＡＰＩ（Ｓｉｇｍａ公司，美
国）：倒置荧光显微镜、激光共聚焦显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ公司，日
２结果
本），１５Ｗ ＵＶ—Ａ和ＵＶ—Ｂ紫外灯（上海晨辰照明电器有限公司）。 ２．１ ＢＭＳＣｓ对豚鼠皮肤光老化的治疗作用：在豚鼠紫外线照
１＿２实验动物与分组：健康雌性白色豚鼠，体重（２２０±２０）ｇ， 射区，局部多点皮内注射ＤＡＰＩ标记的第３代豚鼠ＢＭＳＣｓ，肉
３０只，购自吉林大学医学院实验动物中心。皮肤光老化模型
眼观察可见，对照组皮肤无明显变化；与对照组相比，随照射
豚鼠２０只，随机分为２组：未治疗组（单纯紫外线照射），治
时间的延长，未治疗组皮肤光老化症状逐渐加深，出现皱纹，
疗组（紫外线照射２周后，局部多点皮内注射０．８ｍｌ豚鼠 皮肤松弛、修复性增厚，皮屑，色素沉积，皮革样外观（图１）；
ＢＭＳＣｓ（１×１０ 个／ｍ１），每周一次）。另取正常豚鼠作为对照。
ＢＭＳＣｓ治疗组在治疗前出现的症状与未治疗组相同，治疗后
ＢＭＳＣｓ注射后２４ｈ、５天、１０天，观察ＢＭＳＣｓ对紫外线照射区 皱纹、皮肤松弛、修复性增厚、皮屑等症状逐渐消失，未出现
皮肤的治疗作用。
色素沉着（图２）。
１．３皮肤光老化动物模型的建立：用剪毛剪剪除５ｃｍ×５ｃｍ ２．２ ＤＡＰＩ标记的ＢＭＳＣｓ在紫外线照射区豚鼠皮肤组织内的
区域的豚鼠背部毛，将１５ｗ ＵＶ—Ａ和ＵＶ—Ｂ紫外灯并列置于豚 迁徙和定居：将ＤＡＰＩ标记的ＢＭＳＣｓ经皮肤紫外线照射区局
鼠背部裸露皮肤区正上方３５ｃｍ处，每天照射２ｈ，每天用剃须 部多点皮内注入后，取紫外线照射区的皮肤制备冰冻切片，
刀剔除新长出的豚鼠毛，观察豚鼠皮肤变化。 激光共聚焦显微镜下观察，注射后２４ｈ，ＢＭＳＣｓ出现在真皮
１．４豚鼠ＢＭＳＣｓ的体外分离培养：处死豚鼠乳鼠，７５％酒精浸
层；注射后５天ＢＭＳＣｓ出现在真皮层以及毛囊等组织；注射
泡，无菌条件下取股骨和肱骨，用ＤＭＥＭ培养液反复冲洗骨髓 后１０天广泛弥散在皮肤各层，包括角质层，如图３示。
腔，用２００目滤网过滤，制成单细胞。加入等体积的ｐｅｒｃｏｌ１
分离液，１５００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，吸取单个核细胞层加入ＤＭＥＭ
３讨论
培养液，１ ２００ｒ／ｍｉｎ离心８ｍｉｎ，洗涤细胞，反复２次。计数，
ＢＭＳＣｓ具有：①来源相对广泛、取材方便；②低免疫源性，
以（４±２）×１０６个／ｍｌ细胞接种于培养瓶中，加入含１５％胎牛
并可进行自体移植，大大降低了免疫排斥危险；③易于扩增
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表
源
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期
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20
0
8
[
收稿
厂』
—
0
109
—
修川
日
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]
2008
【
编辑
03
】5
皮肤光老化对皮肤光老化有
修
复
作
用
BM
SC
s
对
皮肤
光老
化
／
张
惠娟
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